9酶非水相催化.ppt

第九章 酶的非水相催化 酶作为催化剂的优点：高效的催化作用、高度的选择性 、反应条件温和等 酶受到的限制： 酶易失活；底物或产物抑制；通常仅在水溶液中表现出高活性； 长期的观点认为: 有机溶剂是酶的变性剂、失活剂这一传统酶学思想的影响下，酶在有机介质中催化作用的研究此前几乎毫无进展。 9.1 非水介质中酶学基础 1984年美国Klibanov A．M．在《科学》 上发表了一篇关于酶在有机介质中催化条件和特点的综述。他们在仅含微量水的有机介质中成功地酶促合成了酯、肽、手性醇等许多有机化合物。并证实了酶在100℃高温下，不仅能够在有机溶剂中保持稳定，还显示出很高的催化转酯活力。 这一发现使原来认为生物催化必须在水溶液中进行的酶学概念发生了革命性的变化。 酶在非水介质中，由于酶处于一种与水极不相同的环境，不可避免地导致酶存在状态与酶结构的改变，在水相中建立起来的酶反应动力学及反应机制都不能直接应用于非水介质中。 它们不同于标准的水溶液体系，在这些体系中水含量受到不同程度的严格控制，因此又称为非常规介质。 酶在非水介质中的催化反应具有在许多常规水溶液中所没有的新特征和优势：①可进行水不溶或水溶性差化合物的催化转化，大大拓展了酶催化作用的底物和生成产物的范围；②改变了催化反应的平衡点，使在水溶液中不能或很难发生的反应向期望的方向得以顺利进行，如在水溶液中催化水解反应的酶在非水介质中可有效催化合成反应的进行；③使酶对包括区域专一性和对映体专一性在内的底物专一性大为提高，使对酶催化作用的选择性的有目的的调控的实现成为可能； ④大大提高了一些酶的热稳定性；⑤由于酶不溶于大多数的有机溶剂，使催化后酶易于回收和重复利用；⑥可有效减少或防止由水引起的副反应的产生；⑦可避免在水溶液中进行长期反应时微生物引起的污染；⑧可方便地利用对水分敏感的底物进行相关的反应；⑨当使用挥发性溶剂作为介质时，可使反应后的分离过程能耗降低. 　　从上世纪八十年代中期开始，酶在非水介质中催化反应的研究十分活跃。  现已报导，酯酶、脂肪酶、蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶等水解酶类；过氧化物酶、过氧化氢酶、醇脱氢酶、胆固醇氧化酶、多酚氧化酶、多细胞色素氧化酶等氧化还原酶类和醛缩酶等转移酶类中的十几种酶在适宜的有机溶剂中具有与水溶液中可比的催化活性。 9.1.1非水介质体系 有机介质反应体系 超临界流体反应体系 气相介质反应体系 离子液介质反应体系 酶促反应的有机介质体系 1、含微量水的有机溶剂单相体系； 2、与水混溶的有机溶剂和水形成的单相体系； 3、水与有机溶剂形成的两相或多相体系： 4、反相胶束体系； 不管采用何种有机介质反应体系，酶催化反应的介质中都含有机溶剂和一定量的水。它们都对催化反应有显著的影响。 1、含微量水的有机溶剂单相体系 用非极性有机溶剂取代所有的大量水，使固相酶悬浮在有机相中。 酶表面含有必需的结合水以保持催化活性(含水量＜2%)。 酶的状态可以是结晶态、冻干状态、沉淀状态，或者吸附在固体载体表面上。 2、与水互溶的有机溶剂单相体系 极性较大的有机溶剂与水形成均匀的单相溶液体系。酶、底物和产物都能溶解在这均一体系中。 适用于在单一水溶液中溶解度很低、反应速度也很慢的亲脂性底物的生物转化。 3、非极性有机溶剂-水两相体系 由水和疏水性较强的有机溶剂组成的两相反应体系。 亲水性物质（酶）溶于水相，疏水性物质（底物或产物）溶于有机相。 反应发生在两相的界面上 振荡与搅拌 4、反胶束体系 反胶束是表面活性剂在非极性有机溶剂中形成的一种聚集体。 在大量与水不相混溶的有机溶剂中，含有少量水溶液，加入表面活性剂后形成的油包水的微小液滴。 反胶束体系能够较好地模拟酶的天然状态，在体系中，大多数酶能够保持催化活性和稳定性。 反相胶束是在与水不互溶的大量有机溶剂中，加入表面活性剂后形成的油包水的微小水滴，也称为微乳液。它是热力学稳定、光学透明的溶液体系。 有机介质酶促反应的优点 1． 有利于疏水性底物的反应。 2． 可提高酶的热稳定性. 3． 能催化在水中不能进行的反应 4． 可改变反应平衡移动方向 5． 可控制底物专一性 6． 可防止由水引起的副反应。 7． 可扩大反应pH值的适应性。 8． 酶易于实现固定化。 9． 酶和产物易于回收。 10． 可避免微生物污染。 9.1.2非水介质中酶的结构与性质 (一) 非水介质中酶的状态 在有机溶剂中，酶分子不能直接溶于其中，它的存在状态有多种形．主要分为两大类 第一类为固态酶，它包括冷冻干燥的酶粉或固定化酶，它们以固体形式存在有机溶剂中。还有利用结晶酶进行非水介质中催化反应和酶结构的研究，结晶酶的结构更接近于