浅析影响血凝和血凝抑制实验de原因.pdfVIP

中国畜牧兽医文摘 2014年 3O卷 第1期 基 础 研 究 浅析影响血凝和血凝抑制实验的原因 许建华 赵 辉 贺 薪 (江苏省睢宁县林牧渔业局，江苏徐州 221200) 血凝和血凝抑制试验是兽医实验室检测鸡新城疫、禽流感免 3 抗原效价的测定及配制 疫后抗体的常用方法之一。它也是检查防疫质量的重要依据。但 3．1 抗原的保存 在实验操作中，经常受到各种因素的影响，带来试验结果误差。 鸡新城疫血凝及血凝抑制试验用的抗原一般有液体和干粉两 1 被检样品 种 ，应—20oC保存 。在进行抗原效价的测定时，同一种抗原最好 1．1 采样 两瓶以上混合后使用，并做重复试验，取其平均值，减少误差。 (1)随机采集的被检样本要能够代表整个鸡群。一般条件 抗原的凝集价在外界不稳定，冷藏保存或反复冻融时其血凝价降 下，同一批次的抽检比例为1％～5％，养殖数量少于1o00只的， 低。测定好血凝价的抗原如果一次不能用完时应分装到灭菌离心 最少采集30个样本检测，采样数量过少，检测的结果不能代表鸡 管内，管上标注分装 日期和效价，每管的分装量最好是一次使用 群的整体情况。日龄不同、免疫时间不同的样品，应该分开编 量，避免反复冻融。使用反复冻融的抗原，血凝抑制滴度会偏 号，不能混编。 高，一般血凝价相差的滴度与血凝抑制价相差的滴度相一致。 (2)采样后要及时送检，不能及时送检的应按照要求进行预 3．2 稀释液 处理，分离的血清不能存放时间过久，否则会降低抗体效价。 稀释液应使用PH为7．0～7．2的PBS缓冲液，PBS液的pH在5-8 1．2 被检血清 以下，红细胞易自凝；试验结果不成立；pH7．8以上凝集的红细胞 采完血样后，应将采血器向后回抽2～3m1，留出空隙倾斜 洗脱加快，使得凝集价检测偏低 ，凝集抑制价偏高。PBS液要现 30o～45。角放置，让其 自然析 出血清 (夏天放在室 内，冬天可 配现用 ，如果用生理盐水代替PBS液，要使用新开瓶的灭菌生理 以放置在37℃温室内析出)。如果采血后马上离心，由于血液中 盐水，稀释液的配制时间不易过长，否则，可能被环境污染，不 蛋白，含量不同，含量偏高的血清不易分离，有的易形成胶冻状 能保持无菌的反应环境，使得检测结果受到干扰，出现试验不成 或不完全胶冻样，这样的血清抗体含量不均匀，检测的结果偏差 立、跳孔等现象。 大。分离好的血清若在1周内即可检验，可放在4 冰箱内保存； 4 加样 如果短时间内不能检测，应放在一2O℃—．8Oc冰箱内保存，运送 病毒悬液和红细胞悬液在使用前一定要摇匀 ，以保证每一 血清时应将血清放在盛有冰块的保温设备中运送。被检血清应避 孔中加入的浓度准确一致，避免加入的浓度高低不一，人为造成 免反复冻融，反复冻融的血清抗体效价会降低。血清保存不当， 误差。摇晃红细胞悬液时力度不宜过大，防止红细胞的结构被破 腐败变质会严重影响试验结果。 坏 ，造成溶血 。 2 反应板 加液体时，避免吸头与反应板孔接触造成污染。尤其是在最 (1)反应板应选择一次性使用96~Lv型板，要保持板面及 后加入红细胞悬液时，孔内已有稀释液、血清、单位抗原等，如 凹孔的干净，板面应水平，不能弯曲、倾斜，使用不合格的反应 果吸头接触到孔内混合液，会造成各个孔内液体相互污染，导致 板会严重影响结果。板孔倾斜 的角度会影响红细胞的沉降速度 ， 试验结果出现误差。所 以，在使用移液器时，一定要保持加样器 角度过小，红细胞沉降加快，血凝价偏低，血凝抑制价偏高。角 吸头与凝集板孔间的距离，以保证每个凝集孑L内液体数量和浓度 度过大，红细胞沉降减慢，血凝价偏高，血凝抑制价偏低。重复 准确。 使用的微量反应板应保持干净，其清洁度对试验结果有很大的影 稀释血清时，在吸取第一孔时要先按下移液器，再插入反应