全反式维甲酸、亚砷酸对白血病NB4细胞CD-%2c44-变异体表达影响.pdf

中 文 摘 要 全反式维甲酸、亚砷酸对白血病NB4 细胞CD44 变异体 表达的影响 摘 要 目的：急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)是 急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia, AML) 的一个亚型，APL 出现 特异的染色体和基因改变，即伴有t(15;17)(q22;q21) ，形成PML/RARa 融 合基因，这是APL 发病及应用全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA) 和亚砷酸(arsenic trioxide, As O )治疗有效的分子基础，其疗效已得到国内 2 3 外的公认。 CD44 是一种广泛分布的细胞表面跨膜糖蛋白，属于粘附分子家族， 可通过选择性表达不同的外显子形成多种同源异构体，即标准型(CD44s) [1] 与变异型(CD44v) 。CD44 高表达于所有AML 亚型原始细胞上 。应用CD44 单克隆抗体能够不同程度的抑制多种髓系白血病细胞株的増殖并诱导细 [2] 胞分化或凋亡 。有报道AML 患者的骨髓及外周血中检测到了CD44v3 、 CD44v6 及 CD44v10 等的高表达。CD11b 是粘附分子整合素家族成员之一， 它主要在成熟单核细胞、自然杀伤细胞、粒细胞上表达，属髓系相关分化 抗原，是APL 细胞向成熟分化的重要分子标志。PML/RARa 融合基因是 APL 特异的基因异常改变，随着APL 向成熟粒细胞分化或凋亡，其表达 逐渐减弱，可作为APL 预后和疗效的判断标准之一。 本研究采用ATRA、As O 作用于人APL 细胞株NB4 细胞，通过光 2 3 学显微镜观察细胞形态、MTT 法观察细胞生长抑制状况、流式细胞术检 测细胞分化及凋亡、并应用RQ-PCR 法检测ATRA、As O 作用前后NB4 2 3 细胞CD44v3 、CD44v6 及CD44v10 及PML/RARa mRNA 表达水平的变化。旨 在探讨诱导APL 细胞分化或凋亡过程中不同CD44v 分子和PML/RARa 表 达的变化，及二者的相互关系，为CD44v 作为白血病诊断、疗效判断及预 后指标提供理论依据。 方法：体外培养人APL 细胞株NB4 细胞，分别用ATRA(1µmol/L) 、 As O (1µmol/L) 、ATRA+As O (1µmol/L+1µmol/L)进行干预，应用 MTT 2 3 2 3 比色法检测细胞生长；用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)分析以上药物 1 中 文 摘 要 对细胞分化的影响；AnnexinV-FITC/PI 双标法检测上述药物对NB4 细胞 凋亡的影响；应用RQ-PCR 法检测细胞中PML/RARa 、CD44v3 、CD44v6 、 CD44v10 mRNA 的表达水平变化。所得结果运用SPSS13.0 统计软件包处理， 以a=0.05 为显著性检验水准。 结果：1 ATRA、As O 作用下NB4 细胞的形态学改变：NB4 细胞株 2 3 具有急性早幼粒白血病细胞的典型形态，胞浆充满颗粒，核膜略凹陷，有 空泡。 Wright’s-Giemsa 染色光镜下观察：经ATRA 作用后NB4 细胞体 积变小、核浆比例缩小、染色质变粗糙、核仁消失；核形态不规则，呈肾 形、杆状及分叶核。As O 作用于 NB4 细胞后表现为细胞体积缩小，细