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广东药学院学报
Journal Pharmaceutical 299
ofGuangdong CollegeJun．2009．25(3)
人纤溶酶原 kringle区缺失突变体的毕赤酵母
表达、产物纯化及鉴定
陈武1，莫炜2，张艳玲2，宋钢2，宋后燕2
(1．广东药学院生命科学与生物制药学院，广东广州510006；2．复旦大学分子医学教育部
重点实验室，上海210032)
摘要：目的研究人纤溶酶原kfin#e区缺失突变体(PLGAK)的毕赤酵母(Phmpastoris)表达、产物纯化
L发酵罐对工程菌PLGAK／GSl
及理化性质鉴定。方法采用7．5 15进行高密度培养、甲醇诱导表达，培
液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶滤过、透析后冷冻干燥。等电聚焦电泳、HPLC、质谱分别检测
PLGAK等电点、纯度和分子量；纤维蛋白平板、肽底物S-2403分别测定PLGAK激活后的纤维蛋白和酰
胺水解活性。结果7．5L高密度发酵叮获得约为400
mg／L培液的表达量，经三步纯化后制备的PLGAK
纯度大于96％。理化分析显示PLGAK的等电点为7．5—7．8，分子量：27．787kD，比活性：23．6U／mg。
结论初步建立了PLGAK的酵母高密度发酵及纯化工艺，所制备半成品活性与血浆提取的PLG相近，具
备放大生产和应用的潜力。
关键词：毕赤酵母；kfin—e区；纤溶酶原；缺失突变体；纯化
中图分类号：TQ92文献标识码：A文章编号：1006—8783(2009)03—0299一05
andidentificationof domaindeletionmutantof
Expression，purification kringle
human inP／ch／a
plasminogenpastor／s
CHEN
Wul，MOWei2，ZHANGYan—lin2，SONG
Gan92，SONGHou—yan2
Sciences
(1．SchoolofLife and Pharmaceutical
Biopharmaceutics，GuangdongCollege，Guangzhou，
Medical
Guangdong510006；2．TheKeyLaboratoryofMolecularMedine，Min矗tryofEducation，Shanghai
200032，China)
College，FudanUniversity，Shanghai
To the andcharactersofthe domain
Abstract：Objective kringle
investigateexpression，purification
deletionmutantof Pichia
human Fermentationat
plasminogen(PLGAK)inpastoris．Methods hiishdensity
a7．5LfermenterwagcarriedoutandPLGAKwas fromtheculturebmthina
(A600200)in purified
three Was after
step—process：
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