利用水稻启动子捕获系筛选水稻胚发育相关基因的初步研究.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2009 , 29 ( 6) : 108～112 利用水稻启动子捕获系筛选水稻胚发育相关 基因的初步研究 1, 3 1, 2 2 2 1, 2 3 1 胡昌泉 　李素一 　刘华清 　刘次桃 　张 　晖 　潘大仁 　王 　锋 ( 1福建省农业科学院生物技术研究所 农业遗传工程重点实验室 　福州 　350003) (2 福建师范大学生命科学学院　福州 　350007　3 福建农林大学生命科学学院　福州 　350013) β (β ) 摘要 　通过对 2227个启动子捕获系中报道基因 葡萄糖苷酸酶 glucu ron ida se, gu s 表达活性 检测 ,筛选到 7个水稻胚中表达 GU S活性的启动子捕获系 ,对其中编号为 W 9 154 的捕获系作了 进一步分析 。Sou thern杂交分析表明 W 9 154 是一个单拷贝 TDNA 插入系 ,其 TDNA 插入在水稻 基因组第 3 号染色体上一个未知蛋白基因的第 2 个内含子中。对该未知蛋白基因上游调控序列 生物信息学分析显示 ,其调控序列除含有 TA TA box和 CAA Tbox等常见启动子元件外 ,还含有 RY基序 、E盒 、G盒及 AACA 等种子特异性启动子的特征性元件 。表达特征分析发现 ,编码上述 未知蛋白的基因在野生型水稻的胚和茎中表达 ,这与捕获系 W 9 154 中 GU S表达活性完全一致 。 这些表明启动子捕获系 w9 154捕获的候选基因可能是一个水稻胚发育相关基因。 关键词 　水稻 　启动子捕获系 　胚发育相关基因　表达特征 中图分类号 　Q786 　　胚的发生和发育直接影响着植物体的繁殖和发 化受体 ,转化所用载体骨架为 pCAMB IA 1300 ,转化载体 育 ,随着分子生物学的不断发展 ,从基因水平上阐明植 其它元件示意如图 1。 物胚发育的分子调控机制取得了许多重要进展 [ 1 ] 。目 前 ,大约有 30 个胚发育相关的基因被克隆 , 它们涉及 了胚发育过程中的细胞有丝分裂和胞质分裂 [ 24 ] 、器官 图 1　启动子捕获载体 TD NA 区示意图 [ 57 ] [ 810 ] [ 11, 12 ] β 发生 、信号转导和代谢 以及表观遗传调控 LB 和 RB 分别为 TDNA 的左右边界 ; gus为 glucuron idase; 等方面 ,这些基因的克隆及相关研究大大促进了人们 Tno s为 Tno s终止子 ; p35 S为花椰菜花叶病毒 对植物胚形成机理的了解 。本研究利用一个水稻启动 35 S启动子 ; hp h 示潮霉素磷酸转移酶基因 子捕获突变体群体 ,通过组织化学染色法分析了 2227 F ig. 1　Schem a tic map of TD NA reg ion 个以 g us为报告基因的水稻启动子捕获系 ,筛选到 7 个 in the prom oter trapp ing vector LB and RB rep resent the left and right