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卷 期 生 物 工 程 学 报
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人生长激素慢病毒载体的构建及其在鼠骨骼肌成肌细胞中的表达
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刘向阳 ,卢永昕 ,徐玉兰 ,李小青 ,刘 隽 ,李爱华 ,罗萍 ,万建平
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QRS T1+DHLU+DH ,QS UDHLT1D ,TS UALQ+D ,QR T1+LV1DH ,QRS WA+D ,QR 81LIA+ ,QSX
G1DH6 +D3 Y8) W1+DLG1DH6
6 华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科,武汉 J$!!
! 华中科技大学同济医学院附属协和医院湖北省干细胞应用与研究中心,武汉 J$!!
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摘 要 构建能表达人生长激素( )的 载体,并实现 基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的
.CI 9Q0D:121,A#Z%7L.CI .CI
表达。体外培养[; 鼠骨骼肌成肌细胞,并通过免疫组织化学方法鉴定所得细胞、用台酚兰染色确定培养细胞的活性并绘制
生长曲线。将目的基因.CI 亚克隆到真核细胞表达载体 9Q0D:1#Z%7L;L=XGX 载体上,构建重组质粒 9Q0D:121,A#Z%7L.CI。将
及阳性对照质粒 分别用 介导转染体外培养的 乳鼠骨骼肌成肌细胞。在
9Q0D:1#Z%7L .CI 9Q0D:1#Z%7LMC\G Q19E0-:+41D ! [;
激光共聚焦扫描显微镜下计数,确定阳性对照质粒的转染数,从而估计该基因的转染效率。加入筛选试剂以获得稳定表达异
源生长激素( )的成肌细胞。收集转染及筛选后的细胞培养基,用放射免疫分析法( )检测重组人生长激素( )的表达
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