竞争性RT-PCR法及对大肠杆菌acrA基因mRNA表达水平的定量研究.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # #% ’ #%( 年 月 日 #$$ ! ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! )*+,- #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 竞争性!#$%! 法及对大肠杆菌 $’! 基因!’( 表达水平的定量研究 ，， 陈爱美/ # % ，陈仪本/ / （广东省微生物研究所 广州 /$$$ ） # （中国科学院南海海洋研究所 广州 /$%$/） % 广东省菌种保藏与应用重点实验室 广州 ） （ /$$$ 摘 要：建立了用于检测大肠杆菌（ ） 的 基因 表达水平的定量竞争性 !#$%’#$’( #)*’ )3DD#(## (#+ 8EF) E36GDE （ ）体系。 合成目标片段的突变型片段（ ）作为内标准模板（ ， ），与目标片段一 HD6E36GDE GDE %#/* I=J4+=9- KJ9=L9+L I1 致的片段（ ）作为目标模板（ ， ），优化两种模板共扩增体系；梯度稀释 与等量大肠杆菌 %5(* 39+M4J KJ9=L9+L 31 I1 :NF) 样本共扩增，扫描电泳条带，软件分析数据。结果表明，引物设计合适，以 和 为模板实现共扩增，产物（ I1 31 %#/* 和 ）通过 琼脂糖凝胶电泳有效分离；梯度稀释 与 共扩增产物出现亮度梯度电泳条带；获得一元 %5(* /C O I1 :NF) 回归曲线; P A $ C%! Q $ C$(R （相关系数 P $ C((，标准差 P $ C$(( ）。该研究成功构建内标准模板，优化的共扩 增GDE 体系实现了对大肠杆菌)3DD#(## 中(#+ 基因8EF) 表达水平的检测，具有简便、高效、敏感度高等优点。 关键词： ；定量竞争性 ；外排系统 (#+ E36GDE 中图分类号： ， 文献标识码： 文章编号： （ ） H5 H(% )