易错PCR法定向进化D_海因酶的初步研究.pdfVIP

( ) ( ) 山西大学学报 自然科学版 29 4 : 425～ 427, 2006 Journal of ShanxiU niversity ( . Sci. Ed. ) N at 　　文章编号:(2006) 易错 法定向进化 海因酶的初步研究 PCR D 孔　荣, 钮利喜, 袁静明 ( 山西大学 生物技术研究所, 山西 太原 030006) 摘　要: 海因酶是生物转化 型氨基酸的关键酶, 在一定浓度 2+ 存在下, 经易错 法重复扩增, 产物构建成 D D M n PCR 重组子, 并建立突变体文库. 经筛选获得了内源 序列变异的变异株. 进化酶催化底物海因水解的活 pET HD T DNA 性为亲本重组酶的 1. 3 倍, 催化底物对羟基苯海因水解的活性为亲本重组酶的2. 4 倍. 关键词: 海因酶; 易错PCR ; 酶活性 中图分类号: Q 814　　　文献标识码:A 海因酶是生物转化 氨基酸过程中第一步反应的酶: 其作用于底物 苯海因或 对羟基苯海因, 催化水解生成 D D DL DL N 氨甲酰基 苯甘氨酸或 氨甲酰基 对羟基苯甘氨酸, 产物再在 氨甲酰基 氨基酸酰胺水解酶的作用下生成相应的 DL N DL N D [1 ] 苯甘氨酸或 对羟基苯甘氨酸 . 苯甘氨酸或 对羟基苯甘氨酸作为合成半合成抗菌素的重要侧链, 具有广阔的工业应 D D D D [2 ] 用前景 . 然而从天然菌株获得的海因酶常常活性较低、热稳定性差、底物专一性低等, 使生物转化 氨基酸受到一定制约. D 因此, 如何改选酶分子, 使之适应人们设定工艺的要求, 就成为工业酶领域的一项重要任务. 许多方法如单菌落筛选, 添加激 活剂或稳定剂, 酶分子侧链修饰, 或基因定点突变等均有可能达到预定目的, 其中酶分子的定向进化技术被认为是当今改造 酶分子的一种较为有效的手段. 分子定向进化( ) 属于蛋白质的非合理设计范畴, 它不需事先了解蛋白质的三维结构信息和作 mo lecular directed evo lution ( ) 用机制, 而是在体外模拟自然进化的过程 随机突变、重组和选择 , 使基因发生大量变异, 并定向选择出所需性质或功能的目 [3 ]