亲和毛细管电泳技术及其应用.pdfVIP

文献综述 亲和毛细管电泳技术及其应用 王京兰 钱小红 军（事医学科学院国家生物医学分析中心 北京 100850） 提 要 对近几年新发展起来的亲和毛细管电泳技术(ACE)的原理、分类及方法作了简要介绍，着重介绍了亲 和毛细管区带电泳、毛细管亲和凝胶电泳、胶束电动色谱中的亲和电泳、亲和毛细管等电聚焦、亲和探针毛细管 电泳等过程和方法。对 ACE在分子生物学、生物化学中的应用及该技术在亲和常数测定、核酸片段识别、竞争 免疫分析、药物先导化合物的筛选等方面的应用也作了介绍。 关键词 毛细管电泳，亲和毛细管电泳，蛋白质，核酸 分类号 O658 带电量有关[1,2.4。小配体引起的变化小，带电量大的 1 前言 配体对受体淌度的影响大。配体浓度 L]、配体-受体 亲和毛细管电泳 (affinitycapillaryelectro- 结合常数Kb对受体迁移时间有正性影响，它们的值 phoresis,ACE)是指在电泳过程中具有生物专一性 越大，受体迁移时间的变化就越大。当配体浓度已达 亲和力的两种分子 受体 (receptor)和其配体 到与受体结合的饱和浓度时，再增加配体浓度，受体 (ligand)间，发生了特异性相互作用，形成了受体－ 迁移时间也不会有很大的变化[4。对于分离配体和 配体复合物，通过研究受体或配体在发生亲和作用 受体反应后的混合物，可通过改变反应时间和反应 前后的电泳谱图变化，可获得有关受体-配体亲和力 物浓度来观察配体、受体结合的中间过程。 大小、结构变化、作用产物等方面的信息。 以区带电泳为基础的毛细管亲和 电泳操作简 多种毛细管电泳模式中均可引入亲和机制。目 单、方便，在测定生物分子相互作用的亲和常数方面 前亲和毛细管电泳技术已用于研究各种类型的配体- 有许多优点，如样品用量少，对样品纯度和准确浓度 受体相互作用，测定其亲和常数。通过改善被分析物 要求不高，可同时测定样品中多个成分与配体作用 的 亲 和统 常Ｊ 数 等 测舛定 亲缀 和统常Ｊ 数 的 般 方 法 是 用 不 同 的电泳迁移行为，可提高分离分辨率和分析灵敏度。 本文仅就ACE的原理及其应用进展作一介绍。 浓度的配体进行多次试验，根据配体浓度与样品迁 移时间或淌度的关系方程来计算结合常数Kb或解 2 各种ACE的原理及方法 吸常数Kd[2,4～7]。 2 2 毛 细 管 亲缀 和 凝 胶 电缬 泳 (C apilary Affinity G el 2.1 以毛细管区带电泳为基础的ACE Electrophoresis,CAGE) 在毛细管区带电泳中，被分析物的电泳淌度 μ 亲和凝胶毛细管电泳是将被分析物的亲和配体 与其质量m和所带电荷z有关:ocz/m2/3。在电泳缓 加尤 入凝胶 夯基 质 手中 使 二 者 发⑸生 特匾异性相 互 プ作用 改谋 冲液中加入被分析样品的带电亲和配体时，样品进 被分析物的迁移速度。亲和配体加入凝胶基质的方 入缓冲体系和配体发生一定程度的相互作用，改变 式有 3种:(a)将配体加入凝胶缓冲液中，形成溶剂 了样品的质量和电荷，导致了电泳淌度的变化。根据 化配体，(b)将大配体嵌在凝胶网格中，(c)直接将配 样品在配体加入前后的迁