用于异种移植的新型基因改造猪的培育.pdfVIP

中华移植杂志(电子版)2014年5月第8卷第2期 ChinJTransplant(E1ectronicEdition)，May2014．V01．8．No．2 ·33 · · 实 验 研 究 · 用于异种移植的新型基 因改造猪的培育 李倩坤 王盈 张曼玲 杨海元 程俊霖 赵丽华 任子健 陈凤娇 万振 昆 张纬 李荣凤 戴一凡 【摘要】 目的 培育用于异种移植的新型基因改造猪，在0．【Gal基因敲除以及膜辅蛋白 CD46、血栓调节蛋 白(TM)基因转入的基础上 ，进一步将 Ⅱ类反式激活因子基因N端缺失显性负 向(cⅡTA-DN)基因转入猪胎儿成纤维细胞 ，以抑制猪 白细胞抗原 (SLA)Ⅱ类分子的表达。 方法 设计合成博来霉素(Zeocin)抗性基因片段 ，并将其与含有CⅡTA．DN基因的pST205载体 连接，构建置于人Tie2增强子和 CMVB—actin启动子下游的pNMU105／CⅡTA．DN表达载体，将 线性化的pNMU105通过脂质体转染法转入已经敲除了Ct—Gal并转入CD46、TM基因的猪胎儿成 纤维细胞 181B(DKO／CD46／TM)。Zeocin抗性筛选转染 pN