黄鳝二价染色体上地高辛配基标记随机引物原位DNA合成的研究Random-primedinsituDigoxigeninL.pdfVIP

遗传HEREDITAS(Beijing)18(4):32-351996 黄鳝二价染色体上地高辛配基标记随机引物 原位DNA合成的研究① 李 奎② 余其兴 赵则春 余 梅② 周荣家 武（汉大学生命科学学院遗传学系，武汉 430072) 摘 要 在黄绪二价染色体上，运用地高辛配基标记的随机引物原位DNA合成技术诱导出了明暗相间、 基本稳定且类似于R带的带状结构．本文对该结果进行了较详细的分析和讨论． 关艘词 二价染色体，引物原位DNA合成，地高辛配基，黄鳍 Random-primedinsituDigoxigeninLabelledDNASynthesison PachyteneBivalentsofRice-fieldEel(MonopterusalbusZuiew) LiKui. YuQixing ZhaoZechun YuMei. ZhouRongjia (DepartmentofGenetics,SchoolofLifeScience,WuhanUniversity,Wuhan430072) AbstractThedarkbandsalternatingwithlightbands,relativelystableandR-band-likestructurewas showed on thepachytenebivalentsofRice-field eel(MonopterusalbusZuicw)byusing the random-primedin situdigoxigenin-labelled DNA synthesis technique, andthe resultswere analysedanddiscussedindetail. Keyword Pachytenebivalents,PrimedinsituDNAsynthesis,Digoxigenin,Rice-fieldeel 染色体上引物原位DNA合成(PrimedinsituDNAsynthesis,PRINS)是近年来发展起来的基因定位和基因 组结构研究的新方法 (9（,10,14)．作者最近曾在黄鳝二价染色体上开展氮标记随机引物原位DNA合成的研究，取 得了一些有意义的进展 ”〔，鉴于PRINS反应中掺人不同的标记物对其结果有明显影响 ’（，‘，本文采用具有安 全、稳定等特点的地高辛标记的单核昔酸D（ig-11-dUTP)掺人，在黄鳝二价体上开展了随机引物原位DNA合成 的研究． 1材 料 与 方 法 1.1实验动物 雄性黄鳝10余尾，购于武汉市集贸市场． 1.2实验药品 地高辛试剂盒德（国宝灵曼公司产品），购自北京中联公司，随机引物购自Amershan公司l（ot12-145).4种脱 氧核糖核昔酸和Klenow酶均购自华美生物工程公司． ①国家自然科学基金和博士点科研基金资助课题部分内容． ②现工作单位：华中农业大学牧医系，武汉430070. .Presentaddress:DepartmentofAnimalScience,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070 4期 李 奎等：黄鳝二价染色体上地高辛配基标记随机引物原位DNA合成的研究 33 1.3引物原位地高辛配基标记DNA合成技术 选取 1周内的新鲜玻片，其预处理和变性方法同染色体原位杂交，预处理主要包括RNaseA消化等步骤。然 后每张玻片加人20川反应液．成份为2（川随机引物，2川dNTP标记混合物，1川KlenowDNA聚合酶，加水至 20川），玻片上盖上20x20cm盖玻片使反应液分布均匀，放人37℃恒温箱中，反应 1小时．同时设置3个对照组． 其一，染色体不变性；其二，反应液中不加Klenow酶；其三，反应液中不加人引物．其余洗脱，免疫学检测和显色 等步骤同地高辛配基标记的原位杂交法(3（)，显微镜下观察并照相，分析10个完整分裂相的染色体相对长度，并将 DNA延伸特征与余其兴等1（993)②报道的黄鳝二价体G带带型特征进行比较． 2结 果 经Giemsa着色后镜检观察，其结果可归纳为以下几点．(1)在 12条二价体上均有较强的