肝郁脾虚证模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质的变化.pdfVIP

肝郁脾虚证模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质的变化1 李艳彦，谢鸣，陈禹，王洪海 北京中医药大学国家重点学科方剂学学科 (100029，北京) E-mail：liyy 1002@163.com 摘 要： 目的：探讨复合造模法复制肝郁脾虚证大鼠模型的 HPA 轴变化及特点。方法：大鼠采 用慢性束缚＋过度疲劳＋饮食失节法，连续三周， 自然恢复一周。观察造模期间各不同时间点 大鼠肾上腺重量及指数、下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、血浆促肾上腺皮质激素 (ACTH)及皮质酮(CORT)的变化。结果：与正常组比较，模型大鼠肾上腺重量第一周显著增加 (P0.001)，第三、四周显著减低(P0.001 和 P0.01)，其肾上腺指数在实验各周均显著高于 正常组(P0.05 和 P0.01)；下丘脑 CRH 第三周显著低于正常组(P0.05），第四周回升并显著 高于正常组(P0.05)；血浆 ACTH 在第一、三、四周均显著降低(P0.05)；血浆 CORT 第一周显 著降低(P0.05)，第二周有所回复，第三、四周仍显著降低(P0.05 和 P0.001)。结论：该肝 郁脾虚证大鼠模型存在 HPA 轴的功能减低，垂体对上位激素调节的反应能力减低可能是该模型 的一个重要的生物学特征。 关键词：肝郁脾虚证；动物模型；大鼠；HPA 轴；复合造模法 根据中医病因发病学原理，作者在参考目前肝郁证模型的慢性束缚应激法[1]和 脾虚证模型的过度劳累加饥饱失常法[2,3] 的基础上，探索用慢性束缚应激＋过度疲 劳＋饮食失节的复合方法成功复制出类肝郁脾虚证的大鼠模型。本文研究了该模型 复制中HPA轴（下丘脑-垂体- 肾上腺皮质）的变化及其特点。 1 材料 1.1 动物：健康雄性 Wistar 大鼠，体重 220 ±10g，级别 SPF/VAF，动物许可证 号为 SCXK(京)2002-0003，由北京维通利华实验动物中心提供。所有动物提前一周 购入，5 只／笼。光照节律 12L∶12D(6:00～18:00)，室温 19±2℃，保持安静。 1.2 造模用束缚筒：自制束缚筒为有机玻璃制成的圆筒状结构，主筒长 25 厘米， 筒口外经 7 厘米，内径5 厘米；前端置有一直径小于主筒的、可以前后调节的带有 透气孔、便于大鼠头伸进的有机玻璃前罩，后端为可调的开关闸门。 1.3 试剂：CRH-RIA 试剂盒由解放军总医院东亚放免研究所提供；ACTH-RIA 试剂盒、CORT-RIA 试剂盒由北京海科锐生物技术中心提供。 1.4 主要仪器：低温离心机(DDL—5 型) ，上海安亭科学仪器厂产；SN—695B 型智能放免γ测量仪，上海核所日环光电仪器有限公司产。 2 方法 2.1 制模方法 采用慢性束缚应激＋过度疲劳＋饮食失节的方法。实验前全部动物进行预游 泳，剔除游泳时间少于 10 分钟、大于 20 分钟的大鼠。 1本课题为国家 211 项目基金资助课题。 通讯作者：谢鸣，医学博士，北京中医药大学国家重点学科教授， E-mail ：xieming603@263.net 。 -1- 造模：合格造模大鼠于每天上午 8：00 置于束缚盒中限制 3 小时，下午 2 ：00 置于盛有温水(22 ±1℃) 的大塑料桶中游泳 10 分钟。隔日喂食(隔日禁食，隔日足量 给食) ，连续 3 周。 自然恢复阶段：于造模第 22 天开始，停止上述造模因素， 自然 饲养条件下观察。 2.2 分组处理 大鼠随机分为正常组和肝郁脾虚模型组( 以下简称模型组) ，每组 40 只。模型组 动物按上述制模方法给予处理，正常组动物不加任何刺激，自然饲养。于造模的第 一、二、三、四周的前一天下午 8 点，分别从两组中随机抽取大鼠 10 只，禁食， 第二天大鼠断头取血 4ml 置于加入 0.3M EDTA ·2Na 40 μl 和抑肽酶 40 μl 抗凝剂 的试管中，4 ℃，3000rpm 15min ，取血浆，待测 ACTH 、CORT ；