2007梓醇促大鼠大脑皮质神经元轴突生长的离体研究.pdfVIP

维普资讯 第32卷第 l7期 中 国 中药 杂 志 Vo1．32，Issue 17 2007年9月 ChinaJournalofChineseMateriaMedica September，2007 梓醇促大鼠大脑皮质神经元轴突生长的离体研究 万 东 ，祝慧凤 ，罗 勇 ，谢 鹏 ，徐晓玉 (1．重庆医科大学 附属第一医院神经内科，重庆400016； 2．重庆医科大学药学院，重庆400016) [摘要] 目的：观察梓醇对原代培养的新生 sD大鼠皮质神经元生存活性及轴突生长的影响。方法：新生24h 内sD大鼠大脑皮质神经元原代培养6d后 ，分为空白组 、终浓度分别为0．25，0．5，1．0，2．5，5．0mg·mI 梓醇干 预组和终浓度为 1．0mg·mL 胞磷胆碱阳性药物对照组。药物干预48h后 ，观察细胞生长情况，用 NF一200免疫 组化染色鉴定神经元，MrITI法检测神经元生存活性，测微尺测量神经元轴突长度。结果：梓醇终浓度在 1～5mg· mL 时，可明显促进神经元轴突生长，2．5mg·mL 时作用最强；梓醇各浓度组神经元生存活性与空白组和胞磷 胆碱组差异无显著性。结论：梓醇能明显促进皮质神经元轴突生长，但对其生存活性无显著影响。 [关键词] 梓醇；皮质神经元 ；细胞培养；轴突长度 [中图分类号]R285．5 [文献标识码]A [文章编号]1001-5302(2007)17-1771-04 梓醇(catalpo1)是地黄最主要的有效成分之一， 1．2 主要试剂与药物 NeurobasalA，DF12培养 具有利尿、缓泻、降血糖及保肝等多种药理作用 。 基，B27添加剂购 自Gibco公司 (美 国)；胰蛋 白酶、 近年发现 4。，梓醇对短暂性脑缺血所致脑损伤具有 二甲亚砜 (DMSO)、四氮唑蓝(MTT)均为美国Sigma 明显的神经保护作用，能保护神经元免遭细胞毒性 公司产品；胎牛血清 (FBS)为Hyclone公司产品；鼠 损害，对脑外伤、脑代谢障碍、缺血性脑卒中和帕金 抗人神经丝蛋 白200×10 (NF-200)单克隆抗体 森病等多种脑部病变可能具有潜在的治疗价值。梓 (BMOIO0)，SABC试剂盒 (SA2001)，DAB显色试剂 醇是否具有 “填精补髓”的作用，能否像地黄饮子一 盒(AR1022)均为武汉博上德生物技术有限公司产 样有效治疗脑卒中后遗症等问题 目前尚未见报道。 品。 脑卒中后神经功能恢复主要依赖于健存神经元轴突 梓醇对照品购 自中国药品生物制品检定所 (批 芽形成新的连接和神经新生l5J，有效促进神经元轴 号 110808-200508)；胞磷胆碱注射液为山西晋新双 突生长和神经新生的药物和手段可能对卒中后神经 鹤药业有限责任公司产品，批号200607281。 功能恢复有益。因此，本研究观察梓醇对培养的大 1．3 主要仪器 二氧化碳培养箱 (美 国Thermo 鼠大脑皮质神经元生存活性及轴突生长的影响，旨 Fomla公司)，96孔细胞培养板 (美 国NatureGene公 在为阐释滋阴类中药或方剂如地黄和地黄饮子等治 司)，倒置相差显微镜和测微尺 (日本 Olympus公 疗脑卒中的作用机制提供实验依据，并为研发新的 司)，550型全 自动酶标仪 (美国BioRad公司)。 有效治疗脑卒中的天然药物奠定基础。 2 方法 1 材料 2．1 皮质神经元培养 无菌条件下取出生后24h 1．1 取材动物 出生后24h内的SD大 鼠乳 鼠，购 内的乳 鼠大脑皮质，剪去胼胝体和其他 白质， 自重庆医科大学实验动物 中心