全人源抗人VEGFR-2抗体抑制黑素瘤的活性研究.pdfVIP

药 物 生 物 技 术 PharmaceuticalBiotechnology 2014，21(4)：311～316 311 全人源抗人 VEGFR-2抗体抑制黑素瘤的活性研究 厉道娟，张 娟 ，贾雪莲，房景如，王 雯 (中国药科大学 生命科学与技术学院，江苏 南京 210009) 摘 要 为探讨全人源抗人血管内皮生长因子受体一2(VEGFR~)抗体Mab-04对黑素瘤的体内外抑瘤活性， 分别通过流式细胞术、MTI法、细胞划痕技术和AnnexinV—FITC／PI双染法检测 Mab．40与不同黑素瘤细胞细胞系 表面VEGFR一2的结合率、对黑素瘤细胞体外增殖能力的影响、抑制黑素瘤细胞迁移和诱导肿瘤细胞凋亡的活性。 并建立B16F10小鼠黑素瘤模型，通过瘤内给药方式 ，给予不同剂量的抗体 ，使用 H_E．(Hematoxylin—eosin)染色法 观察 Mab-04抗体的体内抗肿瘤活性。实验结果发现，Mab-40 能特异性地与黑素瘤细胞表面VEGFR．2结合，有效 抑制黑素瘤细胞的增殖和迁移，并能诱导黑素瘤细胞的凋亡。体内抑瘤实验也表明，Mab一40 对小鼠B16F10黑素 瘤模型具有明显生长抑制作用，在有效剂量范围内，抑瘤率可达到63．9％。实验表明，Mab-04能特异性地与黑素 瘤细胞表面VEGFR-2受体结合 ，通过抑制肿瘤细胞的增殖和迁移、诱导肿瘤细胞凋亡等途径 ，达到抑制黑素瘤生 长的作用。 关键词 抗 VEGFR一2抗体 ；全人源；黑素瘤；抗肿瘤 ；细胞增殖抑制；凋亡 ；小鼠黑素瘤模型 中图分类号 Q73—3 文献标志码 A 文章编号 1005—8915(2014)04—0311—06 黑素瘤是原发于皮肤的高度恶性肿瘤 ，是 目前发病率 (TKI)、VEGFtrap和抗体，其中，很多抗体都是鼠源性 的， 增长最快的恶性肿瘤之一 ，也是皮肤癌中致死率最高的癌 用于人类疾病的治疗不可避免地会引起人抗鼠源抗体的免 症。恶性肿瘤的生长和转移都依赖于肿瘤的新生血管生 疫反应_2 J。本课题组在前期工作中获得抗VEGFR-2的 成。因此 ，通过抑制肿瘤 的血管生成 ，破坏肿瘤的内皮组 单链抗 体 scFv—AK440R及 融合 抗体 scFv-Fc的基 础 织 ，诱导肿瘤细胞的凋亡，就能够达到抑制肿瘤生长的 目 上 “J，通过基因工程方法成功构建表达了抗 VEGFR4的 的 J。因此 ，抑制肿瘤的新生血管生成被认为是 目前最 全人源 IgG1样抗体 Mab．04l12]。本研究 以全人源抗人 有前景的抗肿瘤治疗策略之一。 VEGFR．2抗体 Mab一40 为研究对象，考察其在体 内外抑制 研究表明，VEGF／VEGFR在肿瘤血管生成中发挥着关 黑素瘤生长的活性，为 Mab-40 抑制黑素瘤等实体瘤的活性 键的作用。血管内皮生长因子 (VEGF)与许多实体瘤的生 研究提供了一定的理论基础。 长和转移密切相关 ，这其中包括了黑素瘤” 。VEGF受 1 材料与方法 体家族主要分为3类：VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3。其中， 在新生血管生成中起关键作用的是 VEGFR2(Kinaseinsert 1．1 材料 domainreceptor，KDR)，它高表达于肿瘤组织内血管内皮细 1．1．1 实验动物及细胞株 5～6周龄 C57BL／6小黑 鼠 胞及肿瘤周围的造血祖细胞表面，能与 VEGF—A结合，有效 (SPF级，体重 17～19g)，购买于中国人民解放军军事医学 激活酪氨酸激酶的活性，促进肿瘤的增殖、迁移、血管扩张、 科学院实验动物中心；所有肿瘤细胞株均购于中科院上海 血管渗漏和血管新生 ’ 。因此，阻断VEGF受体与其配 细胞所 。 体 VEGF的相互作用，可以有效的抑制肿瘤新生血管的形 1．1．2 试剂和仪器 DM