腺病毒介导的CTLA4-Ig基因诱导大鼠同种肝移植免疫耐受的实验研究.pdf

鞭鋈盔兰篓主璺壁墼—一 腺病毒介导的甜潍4一Ig蒸西诱爵穴鬣同种肝穆槛免疫耐爱的安黢研究 硕士研究生 蒋网平 罨 帮 赛鞲森魏士 孛文祷要 舅 豹 本实验和餍瓣闭群鼢大蘸鄹避变系Wistar大藏的简种异体原位翳脏移植模憋，以V 烈复裂缺雅型辣病毒为载俸，姆CTLA4-Ig基艘譬入珙瓣内，以缡鹨§一攀耗藉萤酶豹骧瘸 鹈及瓿瑾；并蘧迓体癸实验鞣突重终CTL4一Ig爨会虽囱黠匿囊纲蕤功蕤鲢影璃。 ／ ，方 法 l- 建立供体封闭群SD大鼠到受铺蜒苎系wistar大鼠鼬间种异体骧位肝脏移植模趔· 袭船大鼠捌#istar丈鬣瓣移植翦?天供体∞丈戴溪茎曹黪皴洼封禽露CTLA4一Ig基强 蓼獯藏?天供薄sB夫魏溺茎鬻静辣注射禽鸯kez萋嚣静藤瘸毒菠t×l德≮督，共一次。 3，观察揩标：各组大鼠的术艏情况、生存时阍。在移槌后第1、3、5、7、12天时间段各杀 逆转最多聚酶键反应(RT～PCR)检测移植物中细胞因子表达；免疫组织化学(IHC)检测 移檀耪中CTLA4一Ig基爵盼表达及歪噬细穗帮蕊’绷耱等免癀缎施浸润状况；TdT介导 的d{JTP缺口柬端标记技术㈣NEL)观察移撼物细胞獭亡槽况；器时备对蕊段蓼缝甥豹组 织切片行排斥反应的病瓒学分缀。 塑望查堂跫主堂业墨 《．薅势实验及鼹寨指标；分离壤莽整寨悫瑟者舞爨矗弱蘸噬缀熬，题会或不鑫Lps 0．5¨g／ml、不同浓度的CTLA4一Ig嫩 (10ng肺1)的有血清培养基培器6小时麟．用CsA 蕴燮商爱嚣者联合使耀，势囊鲑壤量辔绻鼹，莠设樱盛装度天Ig为对照，2《夺爵器掰 一 1、VEGF等细胞因子的袭迭。 ELISA法检测细胞上清液中TGF—B 结 果 i+穆撼火魏寥澹对瀚；捧岸辫慧缎秽挺夫鼠撑活酵婀警均为13。l?天，每LacZ’毯理缓期避 襞最疆长?}。差舅有爨蔫牲意义(PO。艇。 基霹表达，纛来经筵懋翡供僖鞠夫鬣瓣照嚣鬻萎鹜黪赫滚辫含有弧eZ基露熊熏缎稼斌 毒麝7天的SD太鼠肝脏均无C孔A4一Ig熬因阳性亵达。CT¨4一Ig组搓移植术后60天， 移檬瀚中仍髓捻溺蜀甜LA4-Ig慕茵酶表达。 3，细飑因子变化：在排斥对照组鄹LacZ+基嗣组疆环嫩中I卜2、I辨y靛表达水平耪对较 孛绌髓嚣子承平瓣变纯奔予撵露对照缓岛CT强4-18墓嚣錾之惩。 4，免癀细胞浸润状况：排斥对照组和LacZ‘然因组移摭肝在术艏第3天艨cDt+T细胞浸润增 荔；娌强4一tg罄蓠踅魏匿整缨麟浸襄穗掇鳃显较蒸恁癯多；e蛙箍骥鳝戆蚕隧龌施浸澜 甓量，e耗嬲一{g基霞缀e98T缨藏浸满鞍CsA处理瘸轻。 处理鳃，差异宵显著性意义。cTL^4一Ig缀奄CsA姓域组相瞎较，各时间段差异鬻显著幢。 在备缀排蓐反废孛均可怒掇亡缨熬存在，发生稠亡嬲缨胞主爱是翳瓠艟，置疆亡糖鼗(矗{) 与急性排斥反应的分缎成正相关。 8．移蘸糕糍I塑捧斥转缓：在穆莲拳慧繁3天及罐露吝鼯潜受蕊躲《一；g缀帮溉处遴鎏夫簸 的排斥程度明娃比排斥对照组和LacZ维轻{第12最时间段钟LA4一Ig处理组太鼠的排斥 ·2- 浙江大学硕十学位论文 程度较CsA处理组轻。 1含量 7．体外实验：经LPS刺激后的臣噬细胞在CTLA4一Is融合蛋白处理组上清液中TGF—B