大鼠脑缺血区局部炎症反应的实验探查.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalof [文章编号] 1(~00—47182【001)03—0271—04 大鼠脑缺血区局部炎症反应的实验探查 雷万龙 ， 刘 勇 ， 袁群芳’， 姚志彬 ， 凌风东 (中山医科太学解剖学教研室 ．广东 广州 510089；西安医科太学解剖学教研室，陕西 西安 710061) [摘 要] 目的：研究脑缺血区血管细胞牯甜分子 一i(VCAi,I—I)表达和单檀／巨噬细胞浸润与脑缺血的病理 联系 方法 ：运用免疫组化染色方法和局部脑缺血／再罐流模型探查40只SD太 鼠脑缺血区VCAM—I阳性血管和 单桉／巨噬细胞的数量变化及其变化发生的时程 。结果：太 鼠脑缺血区微血昔内皮细胞 VCAM一1表达发生在脑缺 血 1h，并在 16h的再灌流期问，其表达逯渐增加 ，显示明显的时间依赖 性变化 。单棱／巨噬细胞在脑缺血 医的浸润 发生在脑缺血 1h／再灌流2h，并随再摧流时间的延长 ，其数量逐渐增加 ，在再灌流 16h，其数量最多，其浸润也显示 明显的时间依帧性变化。脑缺血医血管 内皮细胞 VCAM一1表达的时相与单核 ／巨噬细胞提润的时相基本一致 结 论 ：脑缺血诱导缺血性血管 内皮细胞表选 VCAM一1和诱导单枝／巨噬细胞在脑缺血医疆润 此结果提示 VCAM一1 和单柱／巨嘴细胞可能参与缺血性脑损伤的病理过程 。 [主题词] 内皮，血管；巨噬细胞 ；脑 ；局部缺血 ；再灌注 [中圈分类号] R5123 [文献标识码] A 血管肉皮细胞表 达的粘附分子，促使血 液多彤 侧大脑中动脉主干，用9—0无创伤缝合线在嗅静脉 核白细胞与血管内皮细胞发生粘附 ，进而导致 白细 上方悬 吊大脑中动脉主干 (悬 吊高度约 1—2rnm)，1 胞的浸润。血管细胞粘附分子 一1(vasculareel1adhe— h后 ，抽出缝合线 ．从此时开始再灌流，依次缝合颞肌 sionraolecule一1，VCAM一1)与淋巴细胞和单核细胞 和皮肤。候手术组暴露大脑 中动脉 ，但 不阻断其血 的提润密切相关…，而淋 巴细胞 和单核 ／巨噬细 胞 流 。 (ED2阳性细胞)与缺血性脑损伤的病理联系 J，El 大鼠脑 缺血 ／再 灌流之 后，在 麻醉 下开胸，用 益受到关注。但是，有关 VCAM一1在脑缺血 区表达 09％生理盐水经左心室到达 升主动脉作快速灌流 的结构和发生时间的研究，目前 尚未见报道 ，单核 ／ 冲洗 ，随后用 4％多聚 甲醛 (0．1mol／LPBS配 制 巨噬细胞在脑缺血 区浸 润部位 和时程 尚需深入研 pH7．4)灌注 固定之后取脑 对后 固定的大脑作冰冻 究 为此进行本实验探查，旨在揭示 VCAM一1在脑 切片(片厚 16“m)，用于免疫组化染色： 缺血区表达 的概况和进一步验证单核／巨噬细胞在 3 免疫组化染色{ABC法】和半定■ 脑缺血区浸润的部位和时程，进而探讨 VCAM一1的 主要步骤为：冰冻切片于室温干片30min、人冷 表达和单核 ／巨噬细胞 的浸润与脑缺血／再灌流损伤 丙酮 10rain。然 后 依 次分 别滴加 0．3％ H202于 的病理联系 ； 37℃ ，15rain；03％ TritonX一100，37oC，15rain；3％ 马血清 ，37oC，1h。分别滴加小 鼠抗大 鼠VCAM一1 材 料 和 方 法 和ED2单克隆抗体 (1：1000，美国Seikagaku公司)4 1 实验动物及分组 孵育24h；生物素标记的IgG(1：200)37 ，2h 抗生 用雄性 sD(S1)rague—Dawley)大鼠4O其 (由西安 物素 一生物素复合物 (1：200)37oC，2h。DAB—H2O 医科大学实验动物中心提供)，3—4月龄，体重 200— 显色 2—8min 阴性对照实验用 PBS代替 I抗，其