3′BS-PCR方法探测氟喹诺酮耐药大肠埃希菌gyrA基因248位点突变的探讨.pdfVIP

. 11 . 5 2001 3·92 · Ch in J N o socom io l V o l N o 3 ′ 方法探测氟喹诺酮耐药大肠埃希菌 B S PCR gyrA 基因 248 位点突变的探讨 1 2 2 2 2 夏培元 , 冯　萍 , 钟　利 , 吕晓菊 , 雷秉钧 ( 1. 第三军医大学西南医院, 重庆 400038; 2. 四川大学医学院附一院, 成都 610041) 摘要: 目的　对 3 ′ 法用于快速、准确鉴定耐药细菌染色体基因点突变进行探讨。方法　3 ′ 方法 BS PCR BS PCR 检测喹诺酮耐药大肠埃希菌 gyrA 基因常见突变点(C 248) 是否突变; gyrA 基因喹诺酮耐药决定区 PCR 产物序 列分析进行验证; 研究菌株包括大肠埃希菌野生株 及其实验室诱变耐药株 2、 256 和临床分离耐药株 5、 Ecs R R R 6。结果　 5、 6 和 256 均存在 基因第 248 位 → 的突变; 对 2、 5 和 6 的序列分析显示 5 和 6 R R R R gyrA C T R R R R R ( ) ( ) 还发生了 259 位 → 5 256 突变。结论　3 ′ 方法具有确定突变碱基特异性高, 可靠且简便快速 G A R T R BS PCR 的优点, 适合用于细菌染色体基因耐药突变的快速探测。 关键词: 大肠埃希菌; 聚合酶链反应; gyrA 基因; 突变; 序列分析 中图分类号: R 378. 2+ 1　　文献标识码: B 　　文章编号: (2001) 　　细菌染色体基因突变, 导致氟喹诺酮类药物作 其原理是在 PCR 反应中, 引物3 ′端末位碱基必须与 用靶位 螺旋酶( ) 改变, 是细菌发 模板上相应的碱基配对结合, 引物才能够延伸合成 DNA DNA gyrase 1 生耐药性的主要机制 。研究发现, 大肠埃希菌染色 出新片段。据此将引物设计如下: 其中 2、 3 分别 P P 体 gyrA 基因 5 ′端“喹诺酮耐药决定区(qu ino lone 为点突变核苷酸 248 → 和 248 → 引物。 C G C T , ) ”内的核苷