地龙胶囊对哮喘豚鼠肺组织表达的影响3.pdfVIP

中国中医药科技2005 年 3 月第 12 卷第 2 期 Mar. 2005 Vol. 12 No. 2 ·81 · 地 龙胶囊对哮喘豚鼠肺组织 C - JUNmRNA 表 达 的 影 响 袁清思 　陈以国 　陈若冰 　铭彩荣 (辽宁中医学院职业技术学院·沈阳 110103) 摘 　要 　目的:探讨地龙胶囊治疗哮喘的疗效机理。方法 :用原位杂交方法检测不同实验组豚鼠肺组织的 C —JUN mRNA 的表达。结果:哮喘组豚鼠肺组织的 C —JUNmRNA 呈高表达 ,尤其是在哮喘激发后24h 表达 最明显。而其他三组表达不明显。结论 :地龙胶囊可以通过改善 C —JUNmRNA 的表达治疗哮喘。 主题词 　哮喘/ 中医药疗法 　@地龙胶囊/ 治疗应用 　基因表达 　肺 　哮喘/ 病理学 　豚鼠 　　哮喘是临床的常见病 , 多发病 ,现代研究认为哮喘主要 根据人动物体表面积比换算而成 ,氨茶碱组豚鼠灌胃药量为 是多种炎症细胞参与的气道慢性炎症 ,原癌基因[1 ] 是人体正 005g/ kg ,地龙胶囊组豚鼠灌胃药量为 04g/ kg ,每日 1 次 ,连 常的基因 ,主要调控细胞的生长和分化 ,并参与许多疾病的 续 7d 。分别于最后一次激发后4h ,12h ,24h 取材。 发生 ,发展。有实验研究表明 :C —JUN 的表达是炎症细胞活 22 　实验方法[3 ] 化的早期标志 ,并且与炎症细胞合成、分泌细胞因子和炎症 1 %戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉 ,心脏灌流 ,生理盐水 介质有关。因此本实验研究采用 C —JUN 原位杂交实验方 冲洗 ,4 %多聚甲醛缓慢灌注 ,取相同部位肺叶 ,固定于4 %多 法 ,探讨地龙胶囊治疗豚鼠哮喘的机理和疗效。 聚甲醛溶液中 8h , 石蜡常规脱水 , 浸蜡 , 包埋。切片厚度 1 　材料 5μ m 。载玻片用多聚赖氨酸处理 ,石蜡切片经常规脱蜡至水 , 地龙胶囊使用前配制成浓度为 45 %的溶液 ,氨茶碱片由 30 %过氧化氢室温 5min 以灭活内原性酶,水洗 , 胃蛋白酶消 赤峰制药厂出品 ,于使用前配制成浓度为 1 %的溶液 ,卵蛋白 化 10min ,PBS洗 3 次 ×5min ,预杂交恒温 35 ℃2h ,杂交 37 ℃过 由上海化学试剂厂分装, GB2756 - 81 ,用前分别配成 10 %和 夜 ,2 ×SSC 洗涤 5min ×2 次 ,05 ×SSC 洗涤 15min ×4 次 ,02 1 %浓度的蛋白溶液。豚鼠由辽宁中医学院实验动物中心提 ×SSC 洗涤 15min ×2 次 ,滴加封闭液 30min ,甩去多余液体 , 供。C —JUN 试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。AO 滴加生物素化鼠抗地高辛室温 120min ,PBS洗 5min ×4 次 ,滴 石蜡切片机 ,美国。 加 SABC 室温 30min ,PBS 洗 5min ×4 次 ,滴加生物素化氧化物 2 　方法 酶室温 30min , PBS 洗 5min ×4 次 ,DAB 显色。常规脱水 ,透 21 　动物分组 、造模及给药 明 ,加拿大树胶封片观察。奥林巴斯荧光显微镜观察 ,