表达人内啡肽的腺病毒腺相关杂合病毒的构建及体外表达分析.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’() *! 1( *# 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ +,-,./,0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 表达人内啡肽的腺病毒 腺相关杂合病毒的构建及体外表达分析 ! $ $ 徐学武 俞卫锋 崔贞福 王星华 李 泉 $ （第二军医大学东方肝胆外科医院 麻醉科 病毒基因治疗实验室 上海 $%%!:7） 摘 要：应用分子生物学方法将人 内啡肽融合基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒G+H:$8II’;;，后者与骨架质粒 8 ! 共转染 细胞，包装得到含转基因腺病毒 腺相关杂合病毒 。用 方法对杂合病毒进行鉴定， J;K$D: 3 IL3II’8;; MHN 法测定病毒滴度。杂合病毒感染体外培养细胞观察转基因表达， 法测定培养液中表达产物浓度。 2HO+% ;POQI MHN 法证实转基因正确插入了杂合病毒基因组内，且没有野生型病毒污染，病毒滴度为R$D S %% M4T3.P。结果表 明转基因从第 天到第 天的表达水平呈上升趋势，第 天达到 。 ! ! :!GU3.P 关键词：内啡肽，腺病毒，腺相关病毒，杂合病毒，构建，表达 8 ! 中图分类号： ， 文献标识码： 文章编号： （ ） VD: V97 I %%%8#$%D $%% %#8%7#8%! 基因治疗是基因工程的主要应用之一，通过基 承父病毒的优点，本文进行了人内啡肽的腺病毒3腺 因转导系统将治疗性基因导入体内组织细胞，转基 相关杂合病毒的构建和体外表达。 因在机体内表达，产生具有生物活性的治疗物质，对 材料和方法 疾病产生一定的治疗效果。而提高基因治疗的效率 则是其应用中必须要解决的问题之一，基因治疗系 # 材料 统中基因转导载体是治疗成功与否及治疗效率如何 含人 8 内啡肽融合基因的质粒G2H1;、含增强 ! 的关键因素，一种能够实现高效转导和表达的载体 型绿色荧光蛋白（ ）质粒 、克隆载 ;W4M GXH9%8;W4M 将对该载体的应用产生巨大的影响。大量研究证 体