复旦奥医欣丽康：MiyabenolC和KobophenolA与雌激素受体的结合位点.pdfVIP

维普资讯 生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ACTABIOCHIMICAetBIOPHYSICASINICA2003，35(1)：77—8l MiyabenolC和 KobophenolA与雌激素受体 的结合位点 田春艳 高海东 张宇杲 徐 光 胡昌奇 宋后燕 (复旦大学上海医学院分子遗传教研室 ，上海 200032；1山东大学齐鲁医院普外科，济南250012； 2复旦大学药学院天然药化教研室 ，上海 200032) 摘要 MiyabenolC (MiyC)和 kobophenolA (KobA)是两种新型的植物雌激素 。为了探讨 MiyC和 KobA与雌 激素受体 (ER)的结合部位 ，运用计算机辅助分子模拟构建它们与 ER结合的空间模型，找出结合位点，设计 ER 的两个突变体 MlER(ERM…AG D)和M2ER(ERE GR G)；运用 PCR技术将 ER与 MiyC或 KobA的结合 位点进行突变；运用报告基因检测实验 ，检测 MiyC和 KobA对突变的ER是否具有激活功能。结果显示MiyC激 活 M1ER使之促下游基因转录的作用下降，KobA对 M1ER无激活作用 ；MiyC和 KobA对 M2ER无激活作用。以 上结果显示 MiyC和 KobA与ER的结合位点可能为ER的Glu”、Arg 、Met 和Gly。。 关键词 雌激素受体 ；结合位点；植物雌激素 雌激素受体 (estrogenreceptor，ER)是核受体超 袋的表面形成一个紧密的单位，与配体上的羟基形 家族中的一员，是配体依赖的转录因子。ER可与 成氢键 。ER中与配体结合的这个 口袋的体积远远 多种具有某种特殊结构而化学性质表现多样性的物 大于其天然的配体，除对酚羟基的严格要求以外 ， 质结合 ，从而发挥一系列 的生理功能。ER的有效 此 口袋对配体的结构与大小 的要求是非常随意的， 配体要求具有两个被刚性的疏水集团所分隔的羟基 而且在此 口袋的周围还具有多处的孔穴对其他配体 集团，且其中具有一个以上的酚羟基 。 的某些部位进行容纳，ER的这一特点说 明了ER ER的二级结构包括 12段 Ot螺旋结构 (Helix， 选择配体的灵活性 ，也为我们筛选不同结构的雌激 H1～H12)，H3、H6、H8、H11、H12及 H7和 H8 素及抗雌激素类物质提供了理论基础。不同配体在 之间的无规则卷曲形成 ER与配体结合的 口袋，所 ER容纳配体的 口袋中占有 的空间部位不同，会导 有配体沿着 H3和H11的方向进入这个 口袋。配体 致 ER的构象发生不同的变化，从而使 ER表现出 与ER的结合是通过配体上的羟基与 ER上特殊氨 激活或抑制状态 ¨’ 。 基酸之间形成氢键，以及配体的疏水区与 口袋中的 MiyabenolC(MiyC)和 kobophenolA(KobA)是 疏水氨基酸之间的疏水作用来完成的，氢键的形成 两种二苯乙烯类化合物的聚合物 ，在苯环为结构主 在此过程中起着主要的作用。口袋 内侧氢键的形成 体的基础上具有多个酚羟基 ，符合 ER对配体 的要 与 Glu 和 Arg舛相关。在 H3和 H6之间，Glu 、 求_2。前期工作 已证实它们可与 ER结合，在某些 Arg埘和结构附近 固有 的一个水分子形成一个极性 靶组织具有雌激素样的作用 。我们通过计算机对 洞穴 ，Leu (H6)和 Phe删 (S1)在此洞穴外形成一 MiyC和 KobA 的三维结构进行模建，使之与 ER 钳子结构 ，只可使配体上在平面环状结构上的羟基 进行对接，寻找 MiyC和KobA与ER结合的