中性内切型纤维素酶在毕赤酵母中高水平表达的研究[1].pdfVIP

22 卷 1 期 生 　物 　工 　程 　学 　报 Vol. 22 　No. 1 2006 年 1 月 Chinese Journal of Biotechnology January 　2006 中性内切型纤维素酶在毕赤酵母中高水平表达的研究 　 Highlevel Production of Neutral Endoglucanase 1 in Pichia pastoris 1 1 1 2 1 1 丁少军 ,宋美静 ,杨红军 ,邢增涛 ,周 　蕊 ,曹 　杰 DING ShaoJun1 , SONG Mei-Jing1 , YANG Hong-Jun1 , XING Zeng- Tao2 , ZHOU Rui1 and CAO Jie1 1 南京林业大学生物工程系 , 南京 　210037 2 上海农业科学院食用菌研究所 , 上海 　201106 1 Department of Biological Engineering , Nanjing Forestry University , Nanjing 210037 , China 2 Shanghai Academy of Agricultural Sciences , Shanghai 201106 , China 摘　要 　中性内切型纤维素酶在纺织及造纸工业具有重要的应用 ,为了进一步提高从我国草菇中克隆的一种新的中性内切 ( ) 型纤维素酶 EG1 在 Pichia pastoris 中的表达水平 ,我们进行了提高基因拷贝数及高密度发酵等多种手段实现其高水平表达的 μ 研究。在前期研究的基础上 ,利用对已整合 eg1 的重组子再转化的方法 ,从含有 2000 gL Zeocin 的 YPDSZ 平板上筛选到高抗 ( Zeocin 转化子 ,在摇瓶培养条件下 ,该转化子表达量比原来提高了 38 倍 ,在 pH 4 ～8 条件下均有稳定表达 ,接种量 OD600 = 50) 表达水平最好 ,提高甲醇的诱导浓度对表达有显著的促进作用。用 32L 发酵罐进行了高密度发酵 , 甲醇诱导 955h 后达 到最高值 , 比摇瓶培养再提高了64 倍 ,因此利用高抗 Zeocin 转化子及高密度发酵的手段 ,使 EG1 的表达水平提高了 34 倍 ,蛋 白表达量达880mgmL ,EG1 酶活达到 54336IUmL ,实现了中性内切纤维素酶的高水平表达 ,本研究将大大促进建立我国纺织 用纤维素酶大规模高效生产技术。 关键词 　中性内切型纤维素酶 ,毕赤酵母 ,高水平表达 ( ) 中图分类号 　R39211 　　文献标识码 　A 　　文章编号 2006 Abstract 　The gene ( eg1) encoding for nov