蛋白质的分离、纯化和表征_百替生物.pdfVIP

第七章 蛋白质的分离、纯化和表征 7.1 本章主要内容 1）蛋白质的酸碱性质 2）蛋白质分子的大小和形状 3）蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 4）蛋白质分离纯化方法 7.2 教学目的和要求： 通过本章学习，使学生掌握蛋白质的物理化学性质，在此基础上对现实生活中的现象 给出合理的解释，同时为后续知识的学习打下基础。 7.3 重点难点 1.蛋白质分离纯化方法 2.蛋白质物理化学性质及应用 7.4 教学方法与手段 讲授与交流互动相结合，采用多媒体教学。 7.5 授课内容 一、 蛋白质的酸碱性质 蛋白质也是一类两性电解质，能和酸、碱发生作用。 N -NH2 C -COOH 在蛋白质分子中，可解离基团主要是侧链基团，及少数 端 和 端 。 天然球状蛋白质的可解离基团大部分可被滴定，而某些天然蛋白质中有一部分可解离基因 由于埋藏在分子内部或参与氢键形成而不能解离。 1. Ca2+ Mg2+ cl HPO42++ 等电点和等离子点（中性盐 、 、 、 ） pH 等电点：以兼性离子形式存在的蛋白质的 值。在等电点条件下，蛋白质的电导性、 溶解度最小，粘度最大。 蛋白质的等电点和它所含的酸性氨基酸残基和碱性氨基酸残基的比例有关。 等离子点：没有其它盐类干扰时，蛋白质质子供体解离出的质子数与质子受体结合的 pH 质子数相等时的 值称等离子点，是每种蛋白质的特征常数。 2.蛋白质的电泳分离 service@100 service@100 wwwwww..110000bbiiootteecchh..ccoomm sseerrvviiccee@@110000bbiiootteecchh..ccoomm 3.离子交换层析分离蛋白质 二、 蛋白质的大小与形状 测分子量的方法： 1.化学组成法 2.凝胶过滤法 3.SDS法 4.沉降分析法 5.渗透压法 三、 胶体性质与蛋白质的沉淀 蛋白质分子直径在1-100nm 之间，在水溶液中具有胶体溶液的通性（布朗运动，丁 达耳现象，不能通过半透膜） 透析：将含小分子杂质的蛋白质放入透析袋中，置水溶液中，小分子杂质不断从袋中 出来，大分子蛋白质仍留在袋中。 蛋白质在水中溶解度依赖于多肽链氨基酸残基侧链基团的相对极性，离子化基因数量 越多，溶解度越大。 1.稳定蛋白质胶体溶液的主要因素 1 （ ） 蛋白质表面极性基团形成的水化膜将蛋白质颗粒彼此隔开，不会互相碰撞凝聚而 沉淀。 2 （ ） 两性电解质非等电状态时，带同种电荷，互相排斥不致聚集而沉淀。 一旦电荷被中和或水化膜被破坏，蛋白质颗粒聚集，便从溶液中析出沉淀。 2.沉淀蛋白质的方法 1 [ NH4 2SO4 Na2SO4 Nacl] （ ） 盐析法 ：向蛋白质溶液中加入大量的中性盐（ ） 、 、 ， 使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。 2 （ ） 有机溶剂沉淀法：破坏水化膜，降低介电常数 3 （ ） 重金属盐沉淀 pH大于等电点时，蛋白质带负电荷，可与重金属离子（Hg2+.Pb2+.Cu2+ 等）结成 不溶性沉淀 4 （ ） 生物碱试剂和某些酸类沉淀法 pH小于等电时，蛋白质带正电荷，易与生物碱试剂和酸类的负离子生成不溶性沉淀。 service@100 service@100 wwwwww..110000bbiiootteecchh..ccoomm