类脂A部分组分对脂多糖诱导人自细胞介素6产生的抑制作用.pdfVIP

·l暑2· 中华敲生榜学和免疰学杂志伸虹年第n老第3捐 类脂A部分组分对脂多糖诱导人 自细胞 介素6产生的抑制作用 王明海 ‘W ernerFelst。，ArturJ．Ulmer。，HelmutBrade。 何南祥 ShoichlKusumoto，‘H．-D．Flad。 本文报道了脂乡糖，类脂A 及类脂A部分结构(0‘6成份和类脂x)诱导正常人单个核细胞产生 白细胞介素6 的免疫调节功能的研究。结果表明，脂乡糖的诱导活性大于类脂A；类脂A部分结构缺乏诱导活性，但具有抑制 脂多糖和类脂A介导的 自细胞介素6释放功能，其抑制强度和使用剂量明显相关。此外亦影响细胞 内白细 胞介索 6的台成和释放过程 说明作为脂乡糖生物涯性的拮抗剂 ，类脂A部分结构对调节脂乡糖介导的免疫应普具 有 重 要的意X 。 关t调 ：脂乡糖，凳脂A部分组分；白细胞介素6l抑制作用 革兰氏阴性菌脂多糖 (内毒素 )具有诱导 5．簟个辕细童 (aNC)的分■曩IL_6精生：正常人 单核细胞产生多种细胞因子的功能，如 自细胞 外周血用Hanks液倍比稀释后，置淋巴细 胞 分离 液 介素t(IL-1)，白细胞介素6(IL-6)和 肿 (pharmacia，瑞士)上密度梯度离心。收 集MNC 瘤坏死因子 (TNF)等cl’。近年来，根据 脂 屡，洗涤3次后将细胞悬浮在RPMI1640培养液 (含 2mmoI／L谷氨酰胺，1oou／mI青霉索和1oo．g／ml链 多糖的化学结构，采用化学合成法，合成了各 霉素)中。调细胞浓度至4x161个 ／m ，取 lOO~I的 种脂多糖的部分组分，如类脂A 506成份，类 细胞澈置96孔圆底微量细胞板，然后加八不同浓度 的 脂A前体406成份以及类脂X等(2]。它们 代表 S．a．e．LPS，506成份或部分结构，每 孔 液 体 总 量 了脂多糖生物合成的中间结构 。采用这些物质 ， 2oo~I。将培养扳置 37ac，5嘧CO-条件下孵育 20小 初步研究 了它们诱导细胞产生IL-1和 TNF的 时，离心收获上清液放一20ac保存，待测IL-6活性． 功能 及 协 同免疫调节效应c8]。作者观察了 整个细胞分离及培养过程 中均不接触异种血 清。 脂多糖及其音盼 结构诱导细胞产生 IL一6的功 4．IL一6活性的羽定 ：采用IL一6依 赖 的B9．93A4 能，并采用协同试验的方法，研究了脂多糖部 细胞增殖MTT染色法[6]。即在96孔平底培养扳内加 分结构的免疫浦节效应 现将结果报道如下。 100．1／孔的RPMI1640培养液，再加八按i：3比侧稀 释的待测上清浪 每孔加八lOO~1B9．03A4细胞悬液 材料和方法 1x1oi个／ml。将培养板置 37ac，5呖CO=条件 下培 1．■多■爱羹部分组分：马流产沙门氏苗脂多糖 养56小时 加八1o l／孔~3MTT染色液作用44,时后， (S．a．e．LPS)．参照Ga 1205法提纯c 。凳 脂 A 弃孔内液体 ，加八100l／孔的细胞融解液(0．o4mol／L B06成份 ，为化学台成的含亢酰基链的类脂A；406成 HCI的异 丙醇 )。置震荡器上充分震荡10rain，使 份 ，为化学台成的磷酸化四酰基链类脂A部分结 构； 细胞及染色结晶彻底溶解。将培养板置免疫酶标微量 类脂X，为磷酸化=酰基链的单糖结构 [