噬菌体表面展示技术筛选胰高血糖样肽1受体N端片段的Exendin-4亲和位点.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2009。37(34)：16775—16777 责任编辑 张明明 责任校对 卢瑶 噬菌体表面展示技术筛选胰高血糖样肽 1受体 N端片段的Exendin．4亲和位点 高蔚丰 (宁夏大学生命科学学院，宁夏银JII750o21) 摘要 [目的]通过噬茵体表面展示技术寻找胰高血糖素样肽 1受体N端片段 (nGLP．1R)结合Exendin-4的关键位点。[方法]通过易错 PCR建立一个鼠肺nGLP一1R(从第21个氨基酸到第 145个氨基酸)的噬茵体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体分析突变后 nGLP一1R与Exendin-4结合活性。[结果]nGLP一1R第30位、第46位和第92位氨基酸是其与Exendin-4结合的潜在位点。[结论]关键 位点单个氨基酸残基的突变可以改变nGLP一1R蛋白质的生物学活性。 关键词 胰高血糖素样肽 l受体；Exendin-4；易错PCR；噬菌体表面展示 中图分类号 Q51 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2009)34—16775—03 SeekingforBindingSitesoftheN-TerminalFragmentofGlucogan-likePepfide-1ReceptortoExendin-4ThroughPhageDisplay GAOWei-feng (SchoolofLifeScience，NingxiaUniversity，Yinchuan，Ningxia750021) Abstract IObjectivelToseekforthekeybindingsitesoftheN—terminalfragmentofglucogan—likepeptide1receptor(nGLP一1R)toexendin一 4throughphagedisplay．[Method]ArandomlymutatedphagedisplaypeptidelibraryoftheN—terminal(21—145residues)extracellulardomain ofglucogan·likepeptide1receptorfrom ratlungwasconstructedbyerror·pronePCR．W iththeobtainedmutants，thebindingactivityofthenGLP— lRtoexendin-4wasanalyzed．[Result]The30 ，the46 andthe92ndaminoacidsofthenGLP一1Rwerethepotentialsitesbindingtoexendin-4． [Conclusion]ThemutationofsingleaminoacidatthekeysitesofnGLP一1Rcanchangethebiologicactivityoftheprotein． Keywords Glucogan—likepeptide1receptor；Exendin-4；Error．pronePCR；Phagedisplay 胰高血糖素样肽 1受体 (Glucogan．1ikepeptide1recep— 由于 Exendin-4与 nGLP一1R的结合能力比 GLP一1更 tor，GLP一1R)由Drucher等于 1987年在大 鼠胰 岛瘤细胞 强 ，其结合位点可能存在差异。保守的半胱氨酸 C26发生 RIN1046-38中发现，属于 G蛋 白耦联受体 B家族中的胰高 突变后并未引起nGLP一1R与其配体 Exendin-4结合能力的改 血糖素样受体亚家族。该亚家族最明显的特征是有相对较 变，第 101位和 108位氨基酸是nGLP一1R与Exendin-4结合 长的胞外N端序列，通过3对二硫键形成一个球状结构域， 的潜在位点 。为了找到更多的能影响nGLP一1R结合配体 该区域在配体结合过程中起着关键作用 。 Exendin-4的位点，笔者采用易错 PCR(Error—pronePCR，Ep— 胰高血糖素样肽 1(Glucogan-likepeptide1，GLP-1)属于