Patatin启动子驱动的人胰岛素原基因的植物表达载体的构建.pdfVIP

3‘32· 中国马铃薯，第 23卷，第 6期，2009 中图分类号：$532；Q578 文献标i．n,ti-~：A 文章编号：1672—3635(2009)06—0332—06 Patatin启动子驱动的人胰岛素原基因的植物表达载体的构建 马建忠 ，马雪青，王永刚，宋国伟，周贤靖，王 倩 (兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050) 摘 要：使用马铃薯的偏爱密码子设计合成人胰岛素原基因，以植物表达载体pCAMBIA1301为基础，构建由 patatin启动子调控的人胰岛素原基因植物表达载体pl301Ph，并将导入根癌农杆茵LBA4404中，经PCR鉴定证明，此 基因已整合到衣杆菌Ti上。表达载体的建立为 日后转基因工作奠定了基础。 关键词：patatin启动子；人胰岛素原基因；植物表达载体 糖尿病是继心血管疾病、癌症之后致残率 、 物胰腺中提取，但产品纯度低 ，与人胰岛素天然构 致死率最高的第 大疾病。目前主要治疗方法多依 象存在差异，有免疫原性 ，注射后易引发胰岛素过 赖于胰岛素的使用，胰岛素主要通过化学提取和基 敏、注射部位肌肉萎缩及胰岛素抗性等副作用，且 因工程等方法合成。化学提取法主要从猪、牛等动 收率低、成本高，无法广泛应用于临床用药。此外 世界各国科学家们先后构建了大肠杆菌及酵母表达 收稿 日期：2009—10—21 系统 ，高效地表达 出具生物活性的重组人胰 岛 基金项 目：甘肃省自然基金马铃薯块茎生产天然人胰岛素的研 究资助(3ZS062一B25—023)。 素ll_。其构象虽接近于人胰岛素的天然构象，但 作者简介：马建忠(1963一)，男，研究员，博士，研究方向为植 大都需要经过体外加工，程序复杂，成本较高，活 物基因工程。 通讯作者：E—mail：majz@lut．cn 性亦不及天然人胰岛素。本研究用马铃薯偏好的密 DetectionofPotatoVirusA byRT-PCR GengHongwei，BaiYnaju，FanGuoquna ，GaoYnalinf， ZhnagWei1,ShenYu1,Ma弦，Guoyifna2 f1．Virus—freeSeedlingResearchInstitute，HeilongjiangAcademyofAgriculturalSciences，Harbin，Heilongiiang 150086，China； 2．CropBreedingInstitute．HeilongjiangAcademyofAgriculturalScience，Harbin，Heilongiiang150086，China) Abstract：A pairofprimersPVAFandPVARweredesignedaccordingtothesegmentalnucleolidesequence ofconservativegeneofpotatovirusA(PVA1inGenBanktoamplifythegenefromthehealthyplantsandtheplants whichwereinfectedwithPVA，potatoviursY(PVY)，potatoviursX (evx)andpotatovirusS(PVS)，respectively． OnlyolqePVA specific834bpcDNA productwasamplifiedrfom theplantswhichwereinfectedwithPVA，butnot rfom theothers．ThedetectableviraldsRNA amountofthisRT—PCR was1Pg．ThisRT-PCR hasthegoo