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Notch 信号抑制剂抑制骨髓瘤细胞增殖的机理研究 中 文 摘 要 目的：观察 PHI 对骨髓瘤细胞株增殖、凋亡的作用，研究 PHI 对骨髓瘤细胞 Notch 信号通路及 PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路的影响，阐述抑制增殖、诱导凋亡的分子机 制。 方法：含 10%胎牛血清的 RPMI1640 培养基体外培养RPMI8226 细胞和U266 细胞， 用Western blot 方法及免疫细胞化学方法检测细胞上Notch 信号蛋白的定位及表达 情况。给予不同浓度的 PHI 和 GSI 分别处理瘤细胞 24h 、48h 和 72h，通过台盼兰 测定细胞活力，MTT 法检测细胞增殖抑制情况。利用 DAPI 染色，荧光显微镜观 察细胞形态了解细胞凋亡情况。通过流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响。药 物干预后提取细胞总蛋白，通过 Western blot 方法检测 Notch 通路蛋白表达变化， 以及下游磷酸化Akt 及 Bcl-2 蛋白表达情况。酶联免疫吸附试验（Elisa ）检测细胞 分泌的 VEGF 变化情况。 结果：与正常人淋巴细胞相比，Western blot 和免疫细胞化学染色法检测骨髓瘤细 胞株 RPMI8226 细胞和 U266 细胞高表达 Notch 通路蛋白：在 RPMI8226 细胞中， Notch1 蛋白主要表达于细胞膜和细胞核上，Jagged1 蛋白主要定位于细胞膜上；而 在 U266 细胞中，Jagged1 表达于细胞膜上；与对照组相比，PHI 及 GSI 分别处理 后的 RPMI8226 细胞经 DAPI 染色后荧光显微镜下可见细胞核固缩、折叠，染色 质高度凝聚，细胞核可裂解为碎片，产生凋亡小体；不同浓度的 PHI 和 GSI 作用 于 RPMI8226 细胞后,细胞增殖水平明显下降(P0.05)，且对细胞增殖的抑制作用呈 时间-剂量依赖性。PHI 作用于 RPMI8226 细胞后使细胞周期阻滞在 G0/G1 期。 Western blot 结果分析显示 PHI 和 GSI 作用于 RPMI8226 细胞后 Notch1 、Jagged1/2 及下游蛋白 p-Akt 、Bcl-2 表达明显下调（P0.05 ）；酶联免疫吸附试验结果分析显 示 PHI 作用于 RPMI8226 细胞后细胞分泌 VEGF 水平明显下降（P0.05 ）。 结论：⑴.人多发性骨髓瘤细胞 RPMI8226 和 U266 高表达 Notch 信号蛋白。⑵.用 PHI 和 GSI 均能体外抑制培养的骨髓瘤细胞株 RPMI8226 细胞增殖，诱导细胞凋亡，并 4 使细胞阻滞于 G0/G1 期，这种增殖抑制作用在一定范围内具有时间-剂量依赖性。 ⑶．PHI 和 GSI 体外显著抑制 RPMI8226 细胞中 Notch1 、Jagged1/2 及下游蛋白 p-Akt 、 Bcl-2 表达水平，同时可导致细胞分泌 VEGF 能力下降。⑷.Notch 信号可能作为新的 治疗骨髓瘤的靶点，PHI 作为天然化合物，是一种 Notch 信号抑制剂，是潜在的治疗 骨髓瘤的药物。 关键词：多发性骨髓瘤；Notch 信号； Notch 信号抑制剂；异硫氰酸苯已酯；凋 亡 5 Mechanisms of Notch signaling inhibitors in proliferating inhibition of multiple myeloma cells Abstract Objective: To investigate the effects of cell proliferation and apoptosis with PHI on myeloma cells, Notch signaling and PI3K/Akt/Bcl-2 signaling pathways were analyzed and the potential mechenisam was further discussed. Methods: Western blot and immuocytochemist