重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2009，37(34)：17286—17287 责任编辑 王强 责任校对 傅真治 重组抗原 rMIC3-ELISA检测猪 弓形虫抗体 的研究 江涛 ，姚宝安 ，赵俊龙 (1．长江大学动物科学学院，湖北荆州434o25；2．农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉43o；3 华 中农业大学动物医学院，湖北武汉 430070) 摘要 [目的]探讨检测猪 弓形虫病的新方法。[方法]应用纯化的重组 弓形虫微线体蛋白3(rMIC3)作为包被抗原建立间接ELISA方 法，用于猪弓形虫抗体的检测。[结果]该法所用最佳抗原浓度为3．40 g／ml，最适宜的血清稀释倍数为1：160，与猪瘟病毒等阳性血清 不发生交叉反应，与LAT的符合率为92．56％。[结论]该方法快速、特异、重复性好，可用于猪弓形虫病的诊断和流行病学的调查。 关键词 刚地 弓形虫；rMIC3；EEISA；检测 中图分类号 $828 文献标识码 A 文章编号 0517—661l(2009)34—17286—02 DetectionoftheantibodyagainstToxoplasmagondiiusingtheindirectELISA 、vitlltherecombinantM IC3 JIANGTaoetal (CollegeofAnimalScience，YangtzeUniversity，Jingzhou，Hubei434025) Abstract O『bjective]TI1eaimofthisresearchwastoexploreanewmethodforserodiagnosisofswinetoxoplasmosis．『Method1Anindirect EUSAwiththerecombined c3wasstandardizedofrdetectingtheantibodyagainstToxoplasmagondii．『Resuh1，nleoptimum WOrkingon． centrationoftherecombinant c3andthesernm sampleswas3．4O g／mland1：160respectively．Thecross．reactionbetweenToxoplasma gondiipositivesel31mandclassicalswinefeverviruspositiveserumwasnotobserveduseingrMIC3一ELISA．Thetotalcoincidenceratebewteen theELISAandtheLATwas92．56％．1ConclusionlTheELISAisofsensitivity，shonreactiontime，highspecificity，andreproducibility。and wouldbeausefultoolofrserodiagnosisandseroDreva1enceinvestigationofswinetoxoplasmosis． KeY words Toxoplasmagondii；rMIC3：ELISA；test 弓形虫病 (Toxoplasmosis)是 由刚地 弓形虫 (Toxoplasma 1．2 方法 gondii)引起的一种严重人兽共患病，该病在世界范围内广泛 1．2．1 ELISA操作。将纯化的rMIC3以适宜浓度包被96孔 传播，对孕妇及免疫功能低下者危害严重，能够造成孕妇流 酶标板，100 l／孔。于37℃温育1h后放置于4℃过夜。第 产、畸胎和死胎 ，也常会导致器官移植和AIDS病患者致死性 2天洗板3次，每孔加入 150Ixl1％BSA，37oC封闭45min， 损害…。该病在猪场感染率也很高，常导致母猪流产、弱胎、 洗板。然后加适宜稀释的血清 ，100 J／／孔，37℃温育45min 死胎，高热、消瘦和生长受阻，暴发性流行时可引起猪只大量 后，洗板3次，最后一次拍干。加入 1：5000的山羊抗猪 IgG- 死亡，不仅严重影响着养猪业的发展，而且 弓形虫感染的病 HRP，100 L／孔，37oC温育 1h。洗板4次，加入TMB底物液 猪及其肉制品对人类健康还构成极大的威胁 。 100