重组泡球蚴Em18蛋白不同纯化方法的比较.pdfVIP

2009钜 19(6) 生 物 技 术 45 合效果较好。在一定浓度的PEG溶液中，由于PEG一水之间 大，其次为反应温度、反应时问。 的氢键结合，导致两个细胞接触点处的质膜的脂类分子发生 3 讨论 重组和疏散，由于两细胞接 口处质膜的双分子层之间的相互 细胞融合技术不仅可用于生物学的基础理论研究，而且 亲和以及彼此的表面张力作用，从而促使细胞发生融合 ，但 在生产实践上还有重要的应用价值。PEG介导细胞融合的方 过高浓度 PEG反而会影响细胞融合，因此75％PEG对蟾蜍红 法具有简单、易操作的优点，投资少有利于广泛开展研究和推 细胞的融合率影响较大，融合率较低。 广。前人所用实验材料包括传代的Hala细胞、小鼠细胞 、鸽血 2．2 反应时间对蟾蜍红细胞融合 的影响 细胞、鸡血细胞 、兔血细胞等 ，这些试验材料成本较高，且 表 2 37℃、50％ PEG、不同反应时间时蟾蜍红细胞融合率 由于细胞体积较小观察时费时费力，另外很少采用统计方法 lable2 Ce11fusionra|eoftoadredbh ceilsindifferentreactino Iime 对实验条件进行优化。鉴于此，我们采用价格低廉获得容易 的蟾蜍血红细胞进行实验，采用正交设计对实验条件进行优 化，由于蟾蜍虹细胞体积约为鸡血细胞体积的2倍，因此观察 由表2可知，反应时问为15nfin时蟾蜍红细胞融合率最高。 时非常清晰，便于实验结果统计。 2．3 反应温度对蟾蜍红细胞融合的影响 在镜检观察实验结果时，发现采用凹面载玻片镜检观察 表 3 15min反应时间、50％ PEG、不同反应温度时蟾蜍红细胞融合率 蟾蜍红细胞的融合情况清晰可见，而采用平面载玻片镜检观 rablc3 Cellfusino roteoflf心{redb1《 cellsindifferentreactino tenqjrature 察则很难观察到较好的实验结果。因此在实验结果镜检时最 好采用凹面载玻片。 通过单因素实验，得出同一时间下蟾蜍红细胞融合的最 由表3可知，反应温度为 37~I；时蟾蜍红细胞融合率最高， 适温度为 37℃，低于赵彦禹等… 采用鸡红细胞融合时的 原因可能为随着温度的升高，膜的流动性加快，有利于细胞融 39(C，分析原因可能是蟾蜍为冷血动物，其血红细胞对温度更 合的进行，但温度过高，细胞融合率又降低，因此融台温度必 敏感；最适温度下，细胞融合的最适时间为 15rain，其结果与李 须在细胞能承受的范围之 内。 小玉等 】、赵彦禹等 “所得结果一致；最适温度、反应时间下， 2．4 多因素实验 细胞融合的最适PEG浓度为50％，结果与李士怡等 所得结 表 4 正交设计试验的因素与水平 果一致，但明显高于赵咏梅等 采用鸽血细胞融合时的25％， Fable4 Factorsarl【llevelsi Jn‘ll(’H1 lest 分析原因为其采用的时间为40nfin，温度为 3O℃，长时间反应 条件下，PEG浓度较高会阻碍细胞的融台