镇江地区肠道病毒71型VP1基因的检测及系统进化分析.pdfVIP

医学综述 2009年 12月第 15卷第24期 MedicalRecapitulate．Dec2009．V01．15．N0．24 ·38l5 · 晗 lj。蓬 镇江地区肠道病毒 71型 VP1基因的检测及系统进化分析 吴 燕，高晶晶，于苏兰，袁 潇，王胜军 (江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏 镇江 212013) 中图分类号：R512．5 文献标识码：A 文章编号：1006-2084(2009)24．3815-03 摘要：目的 检测我 国镇江地 区2008年手足 口病 (HFMD)散发病例 中的肠道病毒 71型 源是 HFMD患者。本 文对 (EV71)，并进行毒株的种系进化分析。方法 采集临床 HFMD患者粪便标本，抽提病毒 RNA，通过 镇江地 区肠道病 毒 7l型 巢式聚合酶链反应技术进行特异性扩增。经琼脂糖凝胶 电泳鉴定为阳性的标本，采用 EV7l特异性 引物对其VPI区的核苷酸序列进行扩增。扩增的VPI片段经纯化后与测序载体PET32a(+)连接， VP1基因检测并进行系统进 转化大肠埃希菌 DH5ct，并对阳性质粒进行酶切和测序鉴定。利用 Clustalx和 MEGA4．0分析软件， 化分析。 进行系统进化分析。结果 通过聚合酶链反应扩增获得 EV71VP1基因，根据遗传进化分析发现该 病毒株与 1999、2000年在美国亚特兰大以及2000年 中国北京地区流行的EV71型遗传距离较近，均 1 材料和方法 属于c型。结论 镇江地区HFMD患者中分离的EV7l病毒株属C基因型。 1．1 材料 大肠埃希菌 关键词：手足 口病；EV71；肠道病毒属；系统进化分析 DH5c~由本实验室保存。逆 DetectionandPhylogeneticAnalysisofEnterovirus71inZhenjiang WUYan，GAOJing-jing，YUSu— 转录聚合酶链反应 (reverse lan，YUANXiao，WANGSheng-jun．(SchoolofMedalScienceandLaboratoryMedicine，JiangsuUniversity， Zhenfiang2l2Ol3．C^ina) transcriptase—plymerase chain Abstract：0bjective Todetectenterovirus7l(EV71)geneamongpatientswithhand—foot—and—mouth reaction，RT—PCR)试 剂 盒 disease(HFMD)inZhengjiangin2008andtoanalyzetheevolutionbyphylogeneticanalysis．Methods ，nle EV71VPlgeneswereamplifiedbynestedPCR．Theamp|iconswereinsertedintothevectorPEr32a(+) (FSK一100)购 自TOYOBO公 andtranductedintotheE．coliDH5eL．TheVP1geResequences(89lnucleotides、weredeterminednadeom— paredbyphylogeneticanalysis．Results TheEV 7lVPIgenesweresuccessfullyanlplified byPCR．The 司；ExTaq DNA 聚 合 酶、 EV7lisolatesfromZhenjiangbelongedtogenotypeCbyphylogeneticanalysisandthisgen