斑点叉尾鮰干扰素α基因的克隆和原核表达及生物活性初探.pdf

中文摘要 (AY26；／538)设计并合成了特异性引物，取新鲜斑点叉尾鲴外周淋巴血并分离淋巴 细胞，以草鱼出血病病毒(GCHV)诱导后的淋巴细胞提取其总RNA为模板，用 和序列测定证明该序列是斑点叉尾鲴IFN．Q。斑点又尾鲴IFN．CI开放阅读框由492 个核苷酸组成，推测其编码产物由164个氨基酸组成。经核酸序列分析比对后发现， 96．5％，氨基酸的同源性为92．6％。在NCBI上的登录号为EU783919。 EcoRI，Yho 的重组质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞，通过不同温度、时间诱导表达重组 IFN．Q蛋白。SDS．PAGE和Western Blotting分析表明，在相对分子质量约为39kD (融合蛋白)处有明显的蛋白质表达条带，在304C、5h表达产物最高，表达的融合 kD处 无条带产生。洗涤表达的IFN—Q包涵体并用细胞病变抑制法检测其抗病毒活性法， 通过实验表明所获得的重组斑点叉尾鲴IFN．Q具有抗病毒反应活性，具有一定的生 物学活性。 本实验克隆出斑点叉尾鲴IFN．a基因，并原核表达出斑点叉尾鲴IFN．Q蛋白， 并首次引入国际标准方法用于检测斑点叉尾鲴干扰素的活性。为进一步研究斑点又 尾纲IFN．a在体内外的作用及将其作为目前国内斑点叉尾鲴的病毒病预防和控制 应用于临床提供了物质基础；与此同时，也为国内水产药品朝着无污染、无残留、 安全的方向发展提供了一定的方向指引。 关键词：斑点叉尾鲷；干扰素一Q基因；克隆；生物信息学分析；原核表达 onClone and expressionbiologicalactivity Study prokaryotic Ictalurusta 0t tus(channel punc catfish)interferonalpha (IFN—Q)gene VeterinaryMedicine) FengTing(Preventive viceProfessorYan Directede by Qigui ProfessorGuo Wangzhu (AnimalBiotechnologyCenter,SichuanAgricultural 625014) Abstract ThecDNA which interferon一0【(IFN一0L)forchannelcatfishwas sequenceencoding of clonedfromthefreshchannelcatfish’S blood means lymphocytotes peripheral by the fic to the in using speci primersaccordin