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§2-3 色谱分离条件的选择 分离度(Resolution, R) R是衡量色谱柱分离效果的指标，它表示相邻二组分在色谱中的分离情况。也称分辨度或分辨率。其定义为： 色谱分离中的四种典型情况 高斯峰，底宽度4 ? ，即Y= 4 ? 所以： 色谱分离基本方程式: R与柱效、柱容量和柱选择性之间的关系： 柱效相 柱容量相 选择性相 最佳R值的确定 ①R与n的关系： 在L一定时，H小，R大。 n影响峰宽度，增加n，峰变窄，柱效高； 增大n：增大L、降低H，才能增大R。 ②R与?的关系： 由分离度计算式可得： 例如：要求R=1时，?＝1.25 可见，把?增加至1.5时，不改变柱子，分离度R就可以增加到1.5以上，达到完全分离。 计算： ?＝1.15，R=1.5，Hef=0.1cm，L=? ③R与k的关系： k影响峰位 k增加，tR大，出峰晚，但k不大于10。 最佳k范围：1k10，可得到大的R。 降低柱温能增加k值。 分离度的最佳化 在色谱分析中，希望在较短时间内获得较高的分离度。 究竟需要多大的分离度： 定性分析时：R=0.8（需测tR ） 定量分析时：R=1.0（测峰高时） R=1.25（测峰面积时） 分离操作条件的选择 1、色谱柱的选择 固定相选择： ①选择原则： 当样品的沸点差别为主要矛盾时，选非极性固定液； 当样品的极性差别是主要矛盾时，选极性固定液。 ②最高使用温度 高于柱温，一般分析高沸点化合物时，要选择高温固定液。 ③载体的选择 高沸点样品用比表面小的载体，低固定液配比； 低沸点样品用比表面大的载体，高固定液配比； 柱长选择： 填充柱：2～4m 毛细管柱：20～100m 2、柱温的选择 柱温对R影响甚大，是条件选择的关键。 选择的基本原则： 在使最难分离的组分有尽可能好的分离度的前提下，尽可能采取较低柱温，但以保留时间适宜，峰不拖尾为好。因为T柱温低，K大，R增加，减少固定液流失，柱寿命长；但是Cl增加，峰扩张。 柱温与样品沸点间的关系： ①高沸点混合物（300～400℃），采取1～3％固定液配比，柱温比沸点低100～150℃； ②沸点300℃的样品，可用5～25％固定液配比，柱温比沸点低50℃； ③宽沸点样品应采取程序升温 在程序升温过程中，低温时，沸点低的组分被分离，高沸点组分则不被分离；高温时，则相反，所以样品按程序升温依次被分离。（参见P23，图2-8） 3、载气的选择 低线速时，用N2（重载气，减少纵向扩散）；高线速时，用H2。 柱较长时，柱压大，用H2 ，因为H2粘度小，压力降低。 H2最佳线速度：15～20cm/s N2最佳线速度：10～12cm/s 线速度u=L/tM 4、其它条件选择 ①气化室温度： 以样品沸点或稍高于沸点的温度，保证迅速完全气化，但不要超过样品沸点50℃，防止分解. ②检测室温度： 高于柱温30℃。 温度太低，流出物冷凝，污染检测器；温度太高，灵敏度降低。 ③进样量： 柱长L：2～4m，直径：4～6mm，固定液配比：15～30％。 最大进样量：液体10ul(0.1～5ul) 气体10ml(0.1～10ml) * 用此式可直接从色谱流出曲线上求出分离度 R。 两峰间距离越大，即△tR越大，或两峰越窄，R值就越大，即分离的越好。 ① 分离效果差，柱效低，选择性（ ? ）低； ② 完全分离，柱效高，峰窄，选择性（ ? ）低 ； ③完全分离，选择性（ ? ）增加，柱效低，峰宽； ④完全分离，柱效高，选择性（?）好； ①当R＝1时：△tR＝4?，称4?分离，此时二峰只有2％重叠，98％分离； ②当 R＝1.5时：△tR＝6?，称6?分离，此时二峰基本完全分离，重叠小于1％。 不对称峰： R=1.5 R=0.75 R=1.0 响应信号 保留时间 t, min ?影响峰间距离，增大?，两峰间距变大，分离的好。（见表2-3，P19） 当?从1.1改变为1.2时，R提高一倍。 恒温：45oC 程序升温：30~180oC 恒温：145oC 温度低，分离效果较好，但分析时间长 程序升温，分离效果好，且分析时间短 温度高，分析时间短，但分离效果差 程序升温与恒温对分离的影响比较