禽（鸡）呼肠孤病毒σB编码基因原核表达及重组抗原ELISA诊断试剂盒研制.pdfVIP

摘要 禽呼肠孤病毒(Avian 在临床上主要引起鸡的关节炎，腱鞘炎。其造成患鸡生长抑制、免疫功能降低、继发感染增加等， 给养鸡业带来严重的经济损失。ARV共编码15个蛋白，其中oB蛋白是由s3基因编码，是病毒 的外壳蛋白之一，具有提高感染细胞的能力，并在病毒的致病机理上起着一定的作用。本试验利 用基因克隆技术体外表达oB蛋白并应用表达的融合蛋白作为抗原建立ELISA检测技术。 根据GenBank中已发表的ARVoB序列，设计合成了一对特异性引物，对ARV99G株的S3 检测表明，表达的融合蛋白能够被ARV的阳性血清所识别，具有良好的抗原性。 法，并对ELISA的反应条件进行了探索，确定了抗原的最适包被浓度为599／mL，检测血清稀释 液为100倍稀释，血清与抗原反应最佳反应时间为l小时，酶标二抗最佳作用时间为l小时，底 物的最佳显色时间为15分钟。批内重复试验，变异系数小于10％；批间重复试验，变异系数小 于15％，说明具有很好的重复性。用此方法检测包被的抗原不与NDV,Ai．IBDV等阳性血清发生 交叉反应，表明建立的ELISA诊断方法，具有很好的特异性。应用建立的ELISA方法对98份 临床血清进行检测，结果与进口试剂盒的符合率为94％，表明该方法具有很好的临床使用价值。