光皮桦SSR分子标记体系的建立.pdfVIP

浙 江 林 学 院 学 报 2010，27(3)：464—469 JournalofZhejiangForestryCollege 光皮桦 SSR分子标记体系的建立 尤卫艳，黄华宏，程龙军，童再康，朱玉球 (浙江林学院 林业与生物技术学院，浙江 临安 3l1300) 摘要 ：采用十六烷基三 甲基溴化铵 (CTAB)一硅珠法提取光皮桦 Betul0Z“inin Fa嫩叶DNA，利用近缘种 日本白桦 丑 platyphyllavat．aponica和欧洲白桦 B．pendula的引物，建立光皮桦简单重复序列标记 (SSR)反应体系。在体系建立过程 中，采用单因素法分别对影响聚合酶链式反应 (PCR)反应 的因素进行分析 、结果表 明：在 20 L反应体系中，模板 DNA用量、M 浓度、脱氧核糖核苷酸 (dNTPs)~度 、引物浓度 、 DNA聚合酶用量分别为 6Ong，1．500mmo]L·4，0．175 mm01．L～，2．500mmo1·L～，j．0X16．67nkat时结果 最好 ：引物退 火温度 比 日本 白桦 扩增时提 高 l℃时效果佳 。PCR扩 增产物经聚丙烯酰胺凝胶 电泳后 随机挑取其 中3对引物扩增 的多态性片段进行克隆测序 ．对引物的通用性做进一步检 验 ，序 列经比对后得 到的与原物种序 列相似度 (maxident值 )均在 95．0％以上 、可见 ，近缘 种 日本 白桦和 欧洲 白桦 的 SSR引物可以在光皮桦上应用 图7表2参 17 关键词 ：林木育种学；光皮桦 ：简单 重复序列 (SSR)分子标记 中图分类号 ：$722 文献标志码 ：A 文章编号 ：1000—5692(2010)03—0464—06 AnSSRmolecularlabelingtechniquesystemforBetulaluminifera YOUWeiy·an，HUANGHua—hong，CHENGLong-jun，TONGZai—kang，ZHUYu—qiu (SchoolofForestryandBiotechnology，ZhejiangForestryCollege，Lin’all311300，Zhejiang，China) Abstract：Tofindtheoptimalsimplesequence~epeats(SSR)systemforBetulaluminifera，thecetyhrimethyl— ammoniumbromide(CTAB)methodwasusedtoextractDNAfromtenderleaves．usingtheknownprimers rfom relatedspecies：B．plat)phyllavar．japonicaandB．pendula．Then，onefactorwaschangedatatime tooptimizethepolymerasechainreaction (PCR)．Next，PolyaerylamideGelElectrophoresis(PAGE)was usedtodetecttheamplifiedproductswiththreeprimers’segmentsrandomlyselectedfrom thirty—sixpairsof primersandsequencedtofurtherchecktheuniversalityoftheprimer．Resultsshowedthatinavolumeof20 IxL，theoptimalreactionsystem was60ngtemplateDNA， 1．500mmol·L一Mg ，0．175mmol·L一deoxyri- bonucleotidetriphosphate (dNTP)s，2．500mmol·L～primer，and1．0X16．67nkat polymerase．Corn— paredwithB．platyphyllavar．japonicaandB．pendula，theoptimalannealingtemperatureoftheprimerwas lochigher．Theblastresultsfrom primerAF310851，AB084479，andAB084480showedthatthevaluesof maxidentwereallab