嗜热拟青霉J18胞外β-木糖苷酶纯化和性质.pdf

摘要 本文以嗜热拟青霉J18为木糖苷酶的出发菌种，研究了其液体发酵产胞外阻木糖苷酶的条件 和该酶的纯化和性质，主要结果如下： 通过单因素试验对嗜热拟青霉J18液体发酵的产酶条件进行优化．结果表明：5％的粒度为 0．45mm一0．9 6．5，45℃下培养5 IFffIl的玉米芯，1％尿素，初始pH d。产争木糖苷酶的活力最 高，达3．15U／nil，比酶活为2．43 U／rag。该菌能够利用廉价的天然玉米芯为碳源，尿素为氮源液 体发酵高产胞外B．木塘苷酶，同木聚塘作碳源和有机氮作氮源相比，降低了生产成本。 Fast Flow阴离 以嗜热拟青霉J18发酵液为粗酶液，经硫酸铵沉淀，DEAE-52，Q．Sepharose 子交换层析纯化后，得到电泳纯的B．木糖苷酶。纯化过程中酶活回收率为3％，纯化倍数为35．6， 比酶活为37．7 kDa，Superdex75凝胶过滤法测定酶 U／rag。SDS法测定酶的分子量为53．5 的分子量为51．8kDa，说明该酶为单亚基蛋白。 酶学性质分析表明，嗜热拟青霉J18木糖苷酶的最适反应温度为55℃，最适pH为6．5。在 45℃以内及pH 电泳纯的B-木糖苷酶用于水解木寡糖，TIC分析显示：该酶可将木二糖、木三糖、木四糖和木五 糖水解成木糖。嗜热拟青霉J18所产的木聚塘酶和木糖苷酶协同作用可将桦木木聚塘完全降解成 木糖，水解24h后，其水解液中还原糖含量比只加入电泳纯木聚糖酶的水解液提高了64％． 关键词：嗜热拟青霉，B．木塘苷酶，液体发酵，纯化，酶学性质，协同作用 Abstrcat The fermentationconditionsonextraeellular and purification Liquid-state p．xylosidaseproduction mainresultsareas folows： The On fermentationrevealedthat cobof resultsof 5％tom single-factor-experimentLiquid-state mill一0．9 6．5andcultivation of45Cwemthe size0．45 mm,1％lm．initial particle pH temperature conditionsforextraccllular of3．15U／mland opthllal pxylosidase弦duction．Highestpxylosidase of2．43 wereachieved underthe conditionsafter5 of specific optimal days activity U／mg respectively cultivation．Tiffsstaincould a