缺氧诱导因子1α（HIF-1α）反义寡核苷酸对裸鼠人喉鳞癌移植瘤放疗增敏作用实验研究.pdfVIP

中文摘要 喉鳞癌移植瘤放疗增敏作用的实验研究 摘 要 目的：确立应用缺氧诱导因子．1a(H球．1a)反义寡核苷 酸结合放射应用杀伤喉鳞状细胞癌的各种条件和方法，为喉 鳞癌的基因治疗开辟新途径。 方法 1喉鳞癌裸鼠模型的建立选择Balb／c纯系裸鼠80只，鼠龄 3．4周龄，体重12．189，均为雌性，于背部皮下注入 空气层流架中，恒温恒湿，灭菌处理的饲料和水，供自由食 用。当肿瘤长至8-10mm时，用于实验。 2观察不同放射剂量对荷瘤裸鼠的抑制作用：将肿瘤长至 OCy，采用局部分割照射，每次2Gy。照射10天后杀鼠荷瘤 取出后称重观察抑瘤情况；部分放入70％的酒精中固定，应 用流式细胞技术检测细胞凋亡情况。 3在较适放射剂量下应用HIF．1a反义寡核苷酸对肿瘤的抑 制作用：将肿瘤长至10mm的裸鼠选择成瘤较好的25只随 次注射10叩∥只(按脂质体：DNA=1：1进行包裹加入等量的 细胞培养液，)，0．2ml向肿瘤基底部3点以及中央1点注射， 中文摘要 每3天注射一次，共8次，每次注射后6小时，对裸鼠肿瘤 行C060局部放射2Gy，每3天测量一次鼠重、瘤体最大长 径及最大垂直径，治疗21天后将实验鼠脱颈处死，应用流 式细胞仪、免疫组化、电镜观察肿瘤的，观察抑瘤、凋亡情 况及相关蛋白表达。 结果 至10mm大小。实验组70只裸鼠，7只成瘤弥散，3只未长 做病理示鳞状细胞癌，分化三级。 经单因素方差分析(P0．01)。结果说明随着放疗剂量增加， 抑瘤率也随之增加，20Gy组因照射剂量较大，裸鼠全部死 亡，15Gy组裸鼠皮肤苍白并出现较多红色出血点，裸鼠食 量减弱，体重减轻。各组凋亡率分别为12．474±3．009％； 12．982__．4．064％；15．922+_3．840％；19．768±2．602％： 24．362__．2．131％经KruskalWallisTest，Mean Score分别为 11．1016．4010．50 16．209 P0．01)。结果 4．00(Chi．square 说明随着放疗剂量的增加，瘤细胞凋亡率也增加，故选用 10Gy为最适放疗剂量。 3在较适放射剂量下应用HIF．1a反义寡核苷酸对肿瘤的抑 制作用观察结果 3．1瘤重的变化及抑瘤率：反义组瘤重最小，抑瘤率为 以及正义对照4组(pO．05) 中文摘要 体对照、放疗对照以及正义对照4组(凋亡率p0．05，增殖指 数Kruskal-WallisTest P0．01) Chi-Square=16．084 3．3免疫组化tV法染色显示：HIF-a正义组胞浆有大量棕色 颗粒沉积着色，而反义治疗组表达较少；正义对照组P53表 达于胞核呈棕色颗粒浓染，而反义治疗组表达较少；VEGF 正义对照组胞浆有大量棕色颗粒沉积着色，而反义治疗组表 达较少。 3．4流式细胞仪检测结果显示反义治疗组的HIF．1a、P53、 显低于空白对照、脂质体对照、放疗对照以及正义对照4组 (p0．05)。 3．5电镜结果 电镜下见空脂质体+放疗组、正义+放疗组、反义+放 疗组核膜呈锐角突起，核染色质浓缩，电子密度增加边集于 核模下，有的形成半月(Figl7)。线粒体空泡化明显，粗面 内质网脱颗粒。空白对照组细胞呈椭圆形，细胞质丰富，核 椭圆形略不整形，常染色质丰富，异染色质少，有大而明显 的核仁，线粒体轻度空化，粗面内质网轻度脱颗粒。放疗组 变性坏死为细胞核的碎片。线位体局部水肿，空泡化，部分 和大部分嵴融合、消失，部分和大部分膜消失，粗面内质网 脱颗粒。反义+放疗组喉鳞癌细胞局部核膜呈锐角突起，核 染色质浓缩电子密度增加，边集于核膜下，形成新月状称为 半月，部分细胞膜亦可见球形膨出。线粒体轻度水肿，部分 峭排列紊乱，部分嵴消失，粗面