DNA的粗提取和鉴定PPT课件.pptVIP

专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定 一、实验原理 二、实验设计 若是动物细胞，如何获取DNA滤液？ 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 若是植物细胞，如何获取DNA滤液？ 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？ 为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？ 方案二与方案三的原理有什么不同？ 析出： 溶解： 鉴定： * * 1.DNA的粗提取与鉴定的原理有哪些？ 2.DNA的粗提取与鉴定的操作分为几步，每一步应如何操作，操作的目的是什么？ 1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水而破裂，释放出内容物。 2.洗涤剂能瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 3.DNA在物质的量浓度为0.14 mol／L的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 4. DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。 5.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色。 1、实验材料的选取 选取原则 DNA含量丰富 材料易得 提取简便 鸡血细胞 鸡血细胞核DNA含量丰富 材料易得 鸡血细胞极易吸水胀破 在低浓度的溶液中红细胞会吸水胀破。 二、实验设计 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解。 二、实验设计 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液 可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质 用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。 二、实验设计 3、去除滤液中的杂质 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白质，从而使提取的DNA与蛋白质分开； 方案三是利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 二、实验设计 3、去除滤液中的杂质 滤液+同体积冷却95%酒精 白色丝状物 沸水5min DNA＋二苯胺 蓝色物 二、实验设计 4、DNA的析出与鉴定 将白色丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液中 方法步骤 加入物质 目的 1.制备鸡血细胞液 2.提取细胞核物质 3.溶解核内的DNA 4.析出含DNA的粘稠物 5.滤出含DNA的粘稠物 柠檬酸钠溶液 20 m1蒸馏水 2 mo1 /L的NaCl溶液 加蒸馏水 防止血凝固 加速血细胞破裂 溶解DNA NaCl溶液稀释至0.14mol/L使DNA最大限度地释出 使含DNA的黏稠物被留在纱布上