转基因植物及其产品检测-质量控制与标准物质应用.pptVIP

PCR检测标准化 试剂方法的标准化 工作程序的标准化 标准物质（校准品） 具有可比性的可靠结果 传统理化检测与转基因检测中标准物质的使用 采样，处理 保存 样品制备 检测鉴定 或 定量检测 求值 评价 采样，处理 冷却，保存；4℃或-20℃ DNA提取纯化 定性PCR 或 定量PCR 检测结果与标准物质或其他参照物比较 结果判定 定性参考物质 定量参考物质 标准物质 核酸检测中的量值传递（质粒或合成DNA标准物质） 以一种材料的特性值来校准另一材料统一特性的值 取决于适合的标准物质及其在检测程序中的可代替性 标准物质的特征值与被测量一致 具有足够大特性值，可以稀释成方法工作范围的不同浓度 对特定检测目的的可代替性/适合性已得到证明 稳定性和均匀性经过验证 方法评价 要点： 特异性 灵敏度 符合度 注意事项： 统计学方法 全面：方法、试剂、实验室水平 严重误差产生的原因 其他方面：检测的干扰因素 偏离的估算 偏离的估算是方法评价的重要指标，标准物质可为方法偏离估算提供必要信息： 认定值，不确定值在限制范围内 经认定的由方法引起的不确定值 对标准物质的要求 标准物质类别（基质）在方法测定范围内 标准物质浓度在方法工作范围内 不同浓度标准物质，最好能涵盖方法的所有测量范围 标准物质作为工作标准 最广泛的用途，工作曲线 不同实验室使用相同标准物质，保证结果可比性 方法研究中的标准曲线： 自制内部参考物质制作标准曲线 选择几个点，标准物质作外部参考物质 评价检测结果的可靠性 平均值的置信区间（U） 公式： 用标准物质的U来判断结果的可靠性 标准物质与样品平行测定 如果标准物质的分析结果与标准物质证书上的A±U一致，表示样品检测结果可靠 公式： 检验仪器的可靠性（精密度、准确度） 确定仪器处于正常运转状态 用测定实际样品的操作方法和程序测定标准物质 测定结果与标准物质保证值一致，表明仪器正常运转 尽量使用纯标准物质：质粒标准分子、基因组DNA、合成DNA序列 国内外转基因植物及其产品检测标准物质 IRMM AOCS 出入境检验检疫局 重大专项 标准物质的使用：选用原则 1、对特定检测目的的适用性，包括对基质效应、量值间隔、不确定度的要求： 被测量值 测量区间（浓度） 基质匹配性及可能的干扰因素 样品量大小 均匀性和稳定性 测量不确定度 2、证书的有效性及不确定度的值 3、标准物质及其生产者的以往记录，包括： 是否进行实验室间比对（定值） 是否使用不同检测方法进行了检验 是否有其他实验室应用的成功经验 4、标准物质证书及研制报告内容 5、标准物质的研制与定值程序是否符合相关标准 根据用途选择标准物质方法建立与评价 方法建立的步骤： 方法研究 方法实施 方法验证 方法性能监测 使用标准物质确定方法的不确定度、特异性和灵敏度 方法校正（定量方法） 一般仅纯物质标准物质可用于测量阶段的校准 质粒分子或基因组DNA可用于校正 标准物质作为内部控制，用于确定检测过程中样品的损耗、污染、干扰及其对应的不确定值 当待测样品与标准物质特性高度相似时，可用基体标准物质进行方法校正 同一来源的标准物质一次仅能用于一种目的；不能使用同一来源的标准物质同时进行方法校正和检测程序评估 质量保证与质量控制 实验室长期质量控制： 评价方法或检测人员的性能（检测水平）、变化 对标准物质的要求：均匀性、稳定性、特性值 能力测试 均匀性：保证分发到各实验室的样品相同 稳定性：在运输、保存、检测过程中的稳定性；能力测试持续的时间 实验室间比对 稳定性：实验室间比对必然涉及样品的分发传递 标准物质的均匀性：保证不同实验室间的结果仅由方法的重现性 身份确认与质控结果 特性值 标准物质的准确度应比被测样品预期达到的准确度高3-10倍 如欧盟要求对1%转基因含量的期望分析结果准确度在±50%以内，则所选用的标准物质的准确度应在±5%-±17%之间 标准物质使用注意事项 一般要求： 在合格期内，有合格证书 经过分析测试，证明性能符合要求 使用新的批号时，必须进行对比测试 分析测试的数据，必须进行归档，便于检查 定量检测 标准物质测定值与认定值的比较： 计算标准物质认定值的标准不确定度（UCRM） 估算结果的测量不确定度（Um），可用重现性的标准差代替 计算二者联合不确定度 确认2*UC是否大于认定值与测量值的差 是，则结果可接受 实验室内部参照物 商品化供应标准物质无法满足实验室需要，建立内部参考物质非常必要。注意事项： 选择合适的原料 均匀性测试 制备与分装（均匀性、污染控制、稳定性） 稳定性测试 特征值研究 不确定度计算 文件归档及质量保证 保存及稳定性监测 标准物质管理 一、标准物质来源 标准品作为计量物质应由权威