水稻RAPD反应体系的正交优化.pdfVIP

生物技术通报 · 研 究 报 告 · BIOTECHNOL0GY BULLE刀Ⅳ 2009年 第 12期 水稻 RAPD反应体系的正交优化 张安世 邢智峰 徐九文 张利 民 韦慧彦 (焦作师范高等专科学校生物系 ，焦作 454003；焦作农业科学研究院，焦作 454003) 摘 要 ： 以焦旱 1号总DNA为材料 ，首先对影响 RAPD·PCR反应的模板 DNA、Mg“、dNTP、引物和 TaqDNA聚合酶浓 度等因素进行 了初步优化 ，分析 了各因素对RAPD—PCR扩增结果的影响。在此基础上对影响 RAPD—PCR反应的Mg“、dNTP、 引物和 TaqDNA聚合酶浓度等4个主要 因素进行正交优化 ，研究结果表明：在25ILlRAPD—PCR反应体系中，模板 DNA20ng； Mg“浓度 1．5mmol／L；dNTP的浓度 0．2mmol／L；引物量 15pmol；TaqDNA聚合酶 1．0U。在此最佳条件 下，利用引物B对 l8 个北方粳 稻品种进行 了成功 的扩增 。 关键词： 水稻 RAPD PCR 优化 反应体 系 OrthogonalOptimizationofRAPD Reaction System in Rice ZhangAnshi XingZhifeng XuJiuwen ZhangLimin WeiHuiyan (DepartmentofBiology，JiaozuoTeachersCollege，Jiaozuo454003；JiaozuoResearchInstituteofAgriculturalSciences，Jiaozuo454003) Abstract： Itwastoobtaintheoptimum RAPD—PCRreactionsystem forJiaohanNo．1，onetestwasdesignedtoscreenthesuitable concentrationof4factors(Mg“，dNTP，primer，Taq)inthereactionsystem．Theoptimalprotocolwasaccomplishedbyorthogonalmeth— od in25 lreactionvolumescontaining20ngtemplateDNA，1．5mmol／LMgC12，0．2mmol／LdNTPs，15pmoleachprimerand 1．0U- nitTagpolymerase．TheresultsshowedthatprimersB8canbeusedtoamplify18speciesofJaponicaRice． Keywords： Rice RAPD PCR Optimize Reaction system 水稻是我 国第一大粮食作物，粳稻又是北方主 有价格低廉、简便快捷、通用性好、对 DNA要求不高 要的水稻品种 ，北方粳稻栽培面积虽然仅 占全 国水 等优点而成为主流的分子标记技术之一 ，已经得到 稻的栽培面积 的 15％左右，但 品质较好，在水稻生 广泛的应用。但 由于RAPD技术对反应条件比较敏 产和人民生活中占有极其重要的地位。北方粳稻种 感 ，重复性较差，容易受到 PCR仪器、试剂等因素的 类多，系谱复杂 ，具有丰富的遗传多样性 ，但从形态 影响 ，使得不同研究者的研究结果难 以比较。要 学上很难对其进行类群划分和亲缘关系分析，分子 克服这些不利因素的影响，必须通过优化反应条件 标记技术为此提供了有效地分析手段 ，RAPD就是 以保证结果的可靠性和重复性 ～ 。 其中广泛采用 的方法之一。 为此 ，作者就影响 RAPD反应 中的模板 DNA、 RAPD即随机 扩增 多态性 DNA(random ampli． 引物、dNTP、Mg“和 Taq酶等因素进行了优化试验， fledpolymorphicDNA，RAPD