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色谱分析法 陈兢 3011901005 1、高效液相色谱法（HPLC） 具有在分析过程中不破坏样品的特点，适合于对高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的生化药物的分析。此外，对于某些极性化合物，如有机酸、有机碱等使用液相分析亦为方便。 HPLC法的种类很多，应用广泛。 （1）反相高效液相色谱法（RP-HPLC）： 以C8C18烷基硅烷键合相为柱填料，以甲醇-水、乙腈-水或甲醇、乙腈与缓冲液组成的溶液为流动相，以紫外监测器、荧光检测器或电化学监测器为检测手段，这种色谱体系在肽类、氨基酸、蛋白质和多糖等定量分析中应用广泛。 示例 生白能的RP-HPLC法测定 活性成分为重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，一种蛋白质。 磷酸缓冲溶液：Na2HPO43.55g加水400ml，溶解后用稀磷酸调pH到7.0加水至500ml，摇匀。 色谱条件、计算 (见书P331) 讨论：tR21.236min峰为生白能的主成分，tR13.639min峰为人血白蛋白（生白能添加剂）主成分与添加剂的分离度R2.0。采用梯度洗脱，，流动相中加入三氟乙酸，增大了对蛋白质的洗脱力，且使主成分锋形尖锐、对称。 （2）高效离子交换色谱法（HPIEC）： 是蛋白质、多肽分离分析常见的方法，具有以下特点： 1）根据相应的离子化程度对蛋白质、多肽进