分子伴侣表达载体构建及TEV蛋白酶突变体功能分析.pdfVIP

分子伴侣表达载体构建及TEV蛋白酶突变体功能分析.pdf

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
优秀硕士毕业论文,完美PDF格式,可在线免费浏览全文和下载,支持复制编辑,可为大学生本专业本院系本科专科大专和研究生学士硕士相关类学生提供毕业论文范文范例指导,也可为要代写发表职称论文提供参考!!!

mllllllll…mlllll洲洲11lll㈣11IlI 05 Y17351 摘要 外源蛋白在大肠杆菌中重组表达时,常常会错误折叠或形成无功能的包涵 体。有多种方法能用于改善外源蛋白的重组表达,最常用方法是与分子伴侣共表 达或融合表达,但是后者需要高效的蛋白水解酶切除融合表达的分子伴侣。本研 究,构建了含有多个大肠杆菌分子伴侣的辅助表达载体,分析了它们的功能;利 etchvirus 用定点突变技术获得TEV蛋白酶(tobacco protease)突变体,并分析了体 内和体外的活性,获得以下结果: 1.克隆分子伴侣编码基因。克隆大肠杆菌分子伴侣基因dnaK、dnaJ,grpE、 致。 2.构建分子伴侣表达载体。分别将分子伴侣基因插入pRSFDuet.1和 pC.DJCL(含dnaK、dn甜和c伽)。 groES,grpE,dn水andclpB诱导表达的条带明显,但是未检测到dnaJ的表达条 带。 4.分析分子伴侣表达载体的效应。共表达结果显示,分子伴侣促进玉米西罗 叶绿三酸:铁螯合酶和谷氨酸.1.半醛氨基转移酶的可溶性表达,但是对玉米尿卟 啉原III脱羧酶的可溶性表达没有明显促进作用。 5.改造TEV蛋白酶。以TEV蛋白酶$219V为原始体,定点突变疏水性氨基酸 残基,获得两种TEV蛋白酶突变体(TEVQprotease,TEVr 示TEV蛋白酶突变体的可溶性表达水平在重组大肠杆菌中有明显提高,每升菌液 纯化获得约165 mg的重组TEVQ蛋白酶,108mg的TEVF蛋白酶,明显高于报道的 野生型TEV蛋白酶。 6.分析了TEV蛋白酶的活体和离体活性。TEV蛋白酶与含有TEV酶切位点的 融合蛋白共表达,电泳显示能有效切割融合蛋白,利用纯化的TEV酶,消化纯化 的含有TEV蛋白酶酶切位点的融合蛋白,电泳显示它能有效切割靶蛋白,TEVQ 蛋白酶的活性明显高于TEVF蛋白酶。 综上所述,本文构建了两个分子伴侣辅助表达载体并分析了它们的表达水 平。研究结果显示分子伴侣对改善不同外源蛋白可溶性表达的效率不同,与靶蛋 白的内在性质有关;获得的TEv蛋白酶突变体,与报道的野生型相比,表达量得 到很大提升,在体内和体外都具有较高的活性,为TEV蛋白酶在蛋白的可溶性表 达及蛋白标签的应用奠定基础。 关键词:分子伴侣,TEv蛋白酶,定点突变,大肠杆菌 Abstract is most usedhostfor Escherichiacolithe of extensively productionhomologous inEcoli recombinant oftenfailto foldand proteins.However,the proteins properly asinclusionbodies.Theseveral determinedto were overexpressed chaperones help the recombinant orasthefu

文档评论(0)

baihuamei + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档