小麦淀粉合酶基因III片段的克隆及反义和RNA干扰载体的构建.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（８）：４０～４５ 小麦淀粉合酶基因ＩＩＩ片段的克隆及反义和 ＲＮＡ干扰载体的构建 １ １，２ １ １ １ ２ 康国章 　官春云 　肖向红 　郭天财 　朱云集 　刘　锋 （１河南农业大学国家小麦工程技术研究中心　郑州　４５０００２　２湖南农业大学农学院　长沙　４６１０１２） 摘要　采用ＲＴＰＣＲ方法从小麦品种豫教２号的发育籽粒中克隆出淀粉合酶ＩＩＩ基因（ｓｔａｒｃｈ ? ｓｙｎｔｈａｓｅＩＩＩ，ＳＳＩＩＩ）部分ｃＤＮＡ片段（５０９ｂｐ）（ＧｅｎＢａｎｋＮｏ．ＥＦ４６６００９），同源性比较结果显示，它与 ＧｅｎＢａｎｋ上已报道的ＳＳＩＩＩ基因有高度同源性。以ｐＷＭ１０１质粒为基础，构建了由３５Ｓ启动子调控 的ＳＳＩＩＩ基因的反义表达载体ｐＷＭ１０１ＳＳＩＩＩＡ；另外，还以ｐＦＧＣ５９４１质粒为基础，构建了ＳＳＩＩＩ基因的 ＲＮＡｉ干扰载体ｐＦＧＣ５９４１ＳＳＩＩＩｓａ，这些载体的构建为研究此基因的功能打下了很好的基础。 关键词　普通小麦　淀粉合酶基因ＩＩＩ　表达载体 中图分类号　Ｑ９４５ 　　淀粉是大多数植物（如稻麦、薯类等）种子与块茎 ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＳＳｓ）。ＢＥ具有双重功能：一方面它能切开以 的主要组成部分，在人类生活中起着举足轻重的作用， １，４糖苷键连接的葡聚糖（包括直链淀粉或支链淀粉 α? 根据分子结构将其分为直链淀粉和支链淀粉两大类。 的直链区），另一方面它又能把切下的短链通过 １，６ α? 在小麦中，淀粉占小麦籽粒库容重７０％～８０％，其含量 糖苷键连接于受体上。由于能够在葡聚糖链上引入α? 的高低与组分的不同对小麦籽粒品质有很大的影 １，６糖苷键，故此酶被认为影响了植物淀粉的精细结 ［１］ 构。ＤＢＥ的主要作用是特异水解淀粉中的 １，６糖苷 响 。淀 粉 的合 成 主要 在 ＡＤＰＧ焦磷 酸化 酶 α? ［３］ （ａｄｅｎｏｓｉｎｅ５′ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｇｌｕｃｏｓｅｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ， 键，在淀粉合成中起最后修饰作用 。 ＡＧＰａｓｅ）、淀粉合酶（ｓｔａｒｃｈｓｙｎｔｈａｓｅ，ＳＳ）、淀粉分支酶 　　在淀粉合酶（ＳＳ）方面，ＧＢＳＳ主要功能是参与直链 （ｓｔａｒｃｈｂｒａｎｃｈｉｎｇｅｎｚｙｍｅ，ＢＥ）和淀粉去分支酶（ｓｔａｒｃｈ 淀粉的合成，它是研究最多的淀粉合酶，禾谷类的Ｗａｘｙ ? ［４］ ［２］ 蛋白属于这种酶 。ＳＳｓ则主要参与了支链淀粉中分 ｄｅｂｒａｎｃｈｉｎｇｅｎｚｙｍｅ，ＤＢＥ）等酶的催化下合成 ，这些 酶在淀粉合成中扮演着不同角色。 支链的合成，它有许多同工酶。如玉米的 ＳＳｓ分为 　　ＡＧＰａｓｅ的作用是把来自光合作用的葡萄糖 １磷 ｚＳＳＩ、ｚＳＳＩＩａ和ｚＳＳＩＩｂ，马铃薯的ＳＳｓ也至少有ＳＩ、ＳＳＩＩ和 ?? ［５］ 酸（Ｇ１Ｐ）和ＡＴＰ转变成 ＡＤＰ葡萄糖（ＡＤＰｇｌｕｃｏｓｅ， ＳＳＩＩＩ３种 。每一种可溶性ＳＳｓ在支链淀粉的合成中 ??