超声波辅助农杆菌介导的长春花（Catharanthus roseus）遗传转化.pdfVIP

第28卷 第 6期 上海 交通 大学 学报 (农 业 科 学版1 Vol，28N0．6 2009年 12月 JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSlTYfAGRICUIURALSCIENCE1 Dee．2009 文章编号：1671—9964(2009)06—0615—06 超声波辅助农杆菌介导的长春花(Catharanthusroseus)遗传转化 王 荃，潘琪芳，袁 芳，侯晓晔，赵静雅，唐克轩 (上海交通大学 农业与生物学院 植物生物技术研发 中心，上海 200240) 摘 要：研究以根癌衣杆菌介导结合超声波处理和 乙酰丁香酮诱导，通过对GUS基因瞬时表达来研究影响长春花转化效率的 因素。对转化方法包括超声波处理的功率和时间、乙酰丁香酮(3,5一methoxy一4一hvdroxvacetophenone，AS)的浓度、共培养时间进 行了系统优化。结果表明：在添加AS100txmo1． ·的 1／2MS培养液中，超声波处理功率80w，处理时间10rain，共培养2d，根 癌农杆菌介导的长春花下胚轴遗传转化能获得最佳的GUS基因瞬间表达率 本研究为进一步开展根癌农杆菌介导稳定转化长 春花奠定了基础。 关键词：长春花；超声波；农杆菌介导；下胚轴；遗传转化 中图分类号：QT86；$336 文献标识码：A Sonication-AssistedAgrobacterium-M ediated rllr’。ranSln0rm atJl●0n 0In 【1／。JT 』T ， WANGQu帆，PANQi-fang,YU4NFang,HOUXiao—ye，ZHA0fing-y~TANGKe-xuan (PlantBiotechnologyResearchCenter，SchoolofAgricultureandBiology，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China) Abstract： The influencing factors of transformation of the hypocotyls of Catharanthus ro$eIL$ using sonieation —assisted， 4grobacterium-mediatedmethodwithAcetosyringoneindueenmntwereinvestigated．Theresultsshow thattheoptimalGUStransient expression conditionsarethaithehypocotylsweretreated with 8O W powersonieation for 10 minutesafter immersed in 1／2 MS suspension containing 100 ~xmol’L Acetosyringone and then CO—cuhured for 2 days．This stmly lays a fimndation ofr the establishmentofAgrob{wterium-mediatedstabletransformationofC．roseus． Keywords：C缸 删 珊 roseus；SAAT；hypoeotyl；Agrobacterium—mediatedtransofrmation 。 长春花是夹竹桃科 (Apocy11aetae)长春花属植 杂 ，人工合成难度大 、产量低、成本高，使得长春花 物 ，含长春碱 (Vinblastine1、长春新碱 (Vincristine1、阿 生物碱大规模商业化生产受到 了限制。因此提高植 吗碱 (Ajmalicine)、蛇根碱 fSerpentine)、文朵 灵 物生物碱含量对于开发出低成本 、高效 的抗肿瘤药 fVinddine1等 100多种萜类吲哚生物碱l】I。这些生物 物具有非常重要 的意义 ，并且具有非常广阔的市场 碱多数具有药理活性，尤其是长春碱和长春新碱是 前景。通过代谢工程的手段，尤其是转化长春花代 目前应用