微小牛蜱Bm86基因的克隆、真核表达及cDNA文库的构建.pdfVIP

甘肃农业大学 硕士学位论文 微小牛蜱Bm86基因的克隆、真核表达及cDNA文库的构建 姓名：李文卉 申请学位级别：硕士 专业：预防兽医学 指导教师：罗建勋;刘磊 Y 724288 甘肃农业大学2。。5届硕士毕业论文 微小牛蜱Bm86基因的克隆、真核表达 及eDNA文库的构建 摘要 以微小牛蜱饥饿幼蜱为材料，提取总RNA，采用RT—PCR技术扩增了微小牛蜱 后经PCR％正实目的基因已整合到毕赤酵母染色体中。通过甲醇诱导，重组菌株高效地 对表达产物的性质鉴定表明，其分子量约ff968KD，具有免疫活性。该研究为大量获 得重组Bm86蛋白，研制微小牛蜱分子疫苗奠定基础。 为了自微小牛蜱获得新的免疫相关基因，构建了微小牛蜱eDNA文库。从微小牛 Column 着在其两端加＆甜I／研删IⅡ定向接头；然后将所产生的eDNA分子用Mini Fractionation凝胶过滤柱纯化后定向克隆到九SCREEN载体的EcoRI和HindIII的双酶 切位点之间，体外包装后得到我国微小牛蜱幼虫eDNA文库。经测定，所构建的表达 X X 文库的容量为4．5 1010pfu／ml，重组率为 105pfu／ml，扩增后的文库库容量为7．2 97％．这说明所构建微小牛蜱幼虫eDNA表达文库库容量大、重组率高，为进一步分离 其功能性抗原基因奠定基础。 关键词：微小牛蜱；Bm86基因；表达：毕赤酵母；eDNA表达文库；构建 甘肃农业大学2005届硕士毕业论文 ofBm86 and and Construction Eukaryotic Cloning Expression ofeDNA Library ofBoophilusmicroplus Abstract Inorder tocloneand Bm86 in肭／a expressionofBoophUusmicropluspastoris cloned of was fromthelarvae bv脏二PCI乙The system．Bin86gene B．microplus show nucleotide the resultsthatthe of Bm86 shares97．