1刺五加体外诱导大鼠骨髓基质细胞定向分化为神经细胞的实验研究.pdfVIP

刺五加体外诱导失鼠骨髓基质细胞定向分化为神经细胞的实验研究 KCl 0．089、酚红 0．49、KH：PO,0．069、NaCI89、NaHC030．359、Na2HPO．·12Ht0 0．0292口蒸水充分溶解后定容至1000ml，高压备用。 (6)胰蛋白酶液的配制 u 性0．22m微孔滤器过滤除菌，分装后一20。C低温保存。频繁使用时，4C冷藏保存。 (7)Percoll分离液的配制， Percoll分离液比例为1：10配制。 ①工作液的配制：按照10XPBS与1．1309／ml ②1．0739／ml ③4℃冷藏保存备用。 (8)0．4％台盼兰溶液的配制 准确称取台盼兰O．49，溶解于lOOm]PBS中，用滤纸过滤，室温保存。 4．实验器材 Scientific公司 (1)超净工作台：购自美国Forma Scientific公司 (2)C02孵箱(SL—JC-2323)：购自美国Forma (3)倒置显微镜：购自日本OLYMPAS公司 (4)台式低温冷冻离心机：购自美国Beckman公司 Prodncts公司 (5)离心机：购自KendroLaboratory (6)台式离心机：购自上海安亨科学仪器厂 (7)电冰柜：购白海尔集团 OriOilResearch，Inc． (8)PH计：购自Thermo 0．22um (9)25cm2塑料细胞培养瓶，6孔、12孔、24iL培养板，35mm培养皿， Costar公司 一次性微孔滤器：购自Coming (10)其它常用培养用品如计数板、玻璃培养瓶、培养皿、玻璃离心管、吸管、 盖玻片及一次性注射器均为国产。 5．培养用品的清洗和消毒灭菌 主要目的是去除器皿上的各种微生物及对细胞生长有影响的物质。 (1)玻璃器皿的清洗 ①浸泡：将玻璃器皿放入加有洗涤剂的自来水中浸泡6小时。 山东中医药大学2006届硕士学位论文 ②刷洗：用软毛刷轻轻清洗器皿内外壁，不留死角，然后自来水流水冲净残留洗 涤剂，再放入加有洗涤剂的超声波清洁机中清洗30min，用流水冲净后晾干。 ③清洁液浸泡：将初步清洗好的玻璃器皿放入由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水配制 而成的清洁液中浸泡12h。玻璃器皿残留的未刷洗掉的微量杂质可被完全清除。 ④冲洗：经清洁液浸泡后的玻璃器皿用流水充满、倒掉，重复数遍，直至清洁液 完全被冲洗干净，观察器皿内外壁无污迹，不挂水珠后，用双蒸水冲洗5遍。烤箱内 烘干备用。 (2)橡胶制品的清洗 先用洗涤剂浸泡进行常规清洗，然后用超声洗涤后冲洗干净，放入2％NaOH溶液 中煮沸20min，自来水冲净后用I％HCL煮沸30min，冲洗，用双蒸水冲洗5遍，烘干 备用。 (3)塑料制品的清洗 在超声波清洗机上加入少量洗涤剂清洗，流水冲净，浸泡在清洁液中过夜，再用 流水充满、倒掉，重复数遍，直至清洁液完全被冲洗干净，双蒸水漂洗5遍。烘干备 用。 (4)培养用品的消毒灭菌 ①将500ml，250ml，100m1烘干的玻璃瓶用牛皮纸封口包扎后，放入高压蒸 气消毒锅中，0．1MPa压力下消毒30min。 ②将50mt的培养瓶每3个一组用牛皮纸包装捆扎后，放入高压蒸气消毒锅中， 0．1MPa压力下消毒30min。 ③将清洗后吸管、移液管、青霉素小瓶、胶塞、瓶盖、试管等用品分装入消毒 铝制饭盒内，装入消毒锅之前打开通气孔，让蒸汽充分进入饭盒内，0．1MPa压力下 消毒30min。 ④将消