大鼠嗜铬细胞分泌膜电容和微碳纤电极检测.pdfVIP

生物物理学报 第十五卷 第一期 一九九九年三月 ACTA BIOP HYSICA SINICA Vol . 15 No. 1 Mar. 1999 大鼠嗜铬细胞分泌的膜电容和微碳纤电极检测* 韦顺会 徐建华 瞿安连 吴鸿修 叶 琴 周 专 (华中理工大学生物物理与生物化学研究所 武汉 430074) 摘 要 在原代培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞上 , 综合运用细胞内钙测定法和全细胞膜片钳法 , 以检测膜 电容变化为手段测定单一肾上腺嗜铬细胞的胞吐过程。- 70mV 到 + 20mV 去极化引起的钙电流和 2 + 细胞膜电容的变化以及吹加 60mmol/ L KCl 时 , 细胞内游离钙离子浓度 [ Ca ]i 和细胞膜电容变 2 + 化的同时检测 , 表明了 Ca 对细胞胞吐的控制作用。而用微碳纤电极则能检测到吹加 60mmol/ L KCl 导致嗜铬细胞胞吐时儿茶酚胺的量子化释放。细胞膜电容检测和微碳纤电极检测从不同侧面 2 + 动态的反映了细胞胞吐过程与 Ca 的相关性。 关键词 : 嗜铬细胞 膜电容 去极化 胞吐 微碳纤电极 近年来在单个细胞水平有两类电生理技术在国际上被广泛应用于检测细胞胞吐。即膜电 容和微碳纤电极电化学测量技术 ,这两种技术都具有很高的时间分辨率 ,从而促进了对胞吐过 程的研究 , 因为细胞分泌的中心内容是细胞兴奋时含有神经递质和激素的囊泡与质膜融合, 递质或激素以量子化形式释放至突触间隙或胞外[1 ] 。 膜电容测定法是一种用于观测细胞内分泌囊泡膜与细胞质膜融合过程的方法, 即作为检 测胞吐过程中细胞膜电容增加的手段而被应用 ,其特点在于对胞吐进行实时、高时间分辨率的 测量 ,甚至可以反映单个分泌囊泡中激素或递质的分泌时程和容量。不同作者曾运用此技术, 分别测量了牛肾上腺嗜铬细胞、肥大细胞、胰腺细胞、嗜铬细胞瘤 PC - 12 株系等分泌事件 [1 - 3 ] 。另一方面在嗜铬细胞的分泌过程中 [ Ca2 + ]i 是主要的调控因子之一。应用超活体染色技术 , 特别是 Fura - 2 钙敏感性荧光染料 ,可在不依赖所导入荧光素量和细胞膜厚度的情况下 ,求出 与钙浓度有直接关系的值。由于细胞内钙测定法和全细胞膜片钳法已较普及, 钙测定法和全 细胞膜片钳的并用已是大势所趋。 另一个可选择的测量分泌的方法是 CF E ( Carbon Fiber Elect rode ) 检测 , 能直接地监测 分泌过程 [4 ] 。它用碳纤电极靠近单个分离的细胞以检测分泌囊泡释放所含可氧化的分泌物在 碳纤电极表面氧化产生的电流峰值 ,每个安培峰值代表单个囊泡的内含物的释放。Wi ght man 等的研究已证明 ,此种安培电流信号为嗜铬细胞受刺激时分泌儿茶酚胺的结果 ,每个时间上可 [4 ] 分辨的峰对应于一个囊泡内儿茶酚胺的量子化释放事件 。周专等在 1993 - 1995 年的实验工 作中用膜片钳和 CF E 碳纤电极结合的方法[5 ] ,测试到由动作电位通过电压依赖性 Ca2 + 通道引 ( ) 入嗜铬细胞内的钙所诱发的量子化 uantal 儿茶酚胺激素的释放。