当归下调IL-1α在改善小鼠放射性肺损伤中作用.pdfVIP

当归下调IL-1α在改善小鼠放射性肺损伤中的作用 1 1 1 1 2 1 曹振 ，谢丛华 ，骆志国 ，周福祥 ，韩光 ，周云峰 1 武汉大学中南医院肿瘤放化疗科，武汉（430071 ） 2 武汉大学肿瘤防治研究中心，武汉（430071 ） E-mail ：zhentsao@ 摘 要： 目的：研究当归对放射性肺损伤中 IL-1 的干预作用，初步探讨当归防治放射性肺 损伤的机制。方法：所有动物随机分为生理盐水对照组、当归对照组、单纯照射组和当归干 预组四组，取 1、24 、72h、1、2 、4 、8、16 和24w 9 个时间点分别取肺组织检测。用HE 和Masson 染色评价组织病理变化和纤维化；免疫组化判断IL-1α 的表达定位和相对含量； 实时定量RT-PCR 和 Western blotting 分别反映肺组织IL-1α的mRNA 和蛋白表达情况。结 果：模型的组织病理变化符合经典的放射性肺损伤的改变，应用当归能改善病理改变和减少 胶原沉积；IL-1α的免疫组化染色主要是支气管上皮细胞和多种炎症细胞着色，当归干预组 着色浅，炎症细胞少；mRNA 含量在8 周达到峰值，蛋白含量分别在24 h 和8 周有两个高 峰，当归干预组在各时间点均能下调IL-1α的表达。结论：在我们的放射性肺损伤模型中， IL-1α表现为双相升高，当归能明显下调两个峰值IL-1α的表达，并显著改善放射性肺损伤。 关键词：放射性肺损伤，IL-1α，当归 肺是辐射线中度敏感器官，接受超过其耐受阈值的剂量会产生不同程度的放射性肺损伤 （radiation-induced pulmonary injury, RPI ）。RPI 的发病机制目前尚无定论，目前认为是由于 肺组织受射线照射后引起了多种细胞和细胞因子共同参与的结果。我们实验室先前的工作证 明了当归能明显下调TNF-α和TGF-β1 从而改善RPI [1,2] 。许多文献报道，IL-1 在RPI 的发 病中发挥了重要的作用[3,4] 。本研究利用全胸单次照射12 Gy 的小鼠放射性肺损伤模型，试 图揭示当归对RPI 中IL-1 的干预作用，初步探讨当归防治RPI 的分子机制。检测IL-1α是 [5] 因为IL-1α在小鼠中是主要存在形式，而IL-1β在人类中是主要的 。 1. 材料和方法 （1）主要试剂：25% 的当归注射液为武汉大学中南医院药厂生产；荧光实时定量RT-PCR 小鼠IL-1α和内参管家基因GAPDH 的引物和探针由上海闪晶生物有限公司设计合成；兔抗 鼠多克隆抗体，生物素标记二抗和DAB 显色试剂盒购于武汉博士得生物公司；羟脯氨酸碱 水解法含量测定试剂盒购于南京建成公司。 （2 ）实验动物及分组方法：近交系C57BL/6J 小鼠（SPF 级别）共144 只，购于北京维 通利华实验动物中心，许可证号：SCXK(京)2002-009 ，成年雌性，8 周龄，体重20 g 左右， 4～6 只一笼饲养于武汉大学实验动物中心ABSL-3 实验室SPF 级屏障系统中。将所有动物 按随机数字表法随机分为4 组：⑴生理盐水对照组（N 组）：共18 只，每只每天腹腔注射生 理盐水20 ml·kg-1 ；⑵当归对照组（A 组）：共 18 只，每只每天腹腔注射25 ％当归注射液 20 ml·kg-1 ；⑶单纯照射组（NX 组）：共54 只，每只每天腹腔注射生理盐水20 ml·kg-1 加全 胸单次照射12 Gy；⑷当归干预组（AX 组）：共54 只，每只每天腹腔注射25 ％当归注射液 20 ml·kg-1 加全胸单次照射12 Gy。于照射前1 周开始注射药物，直至照射后2 周结束。 [1,2] （3 ）照射方法：同参考文献 （4 ）肺组织取材及处理：分别在照射后1、24 、72、1、2 、4 、8、16 和24w 等9 个时 间点断颈处死实验组及相