庆大霉素单克隆抗体的制备及初步应用.pdfVIP

中文摘要 氨基糖苷类抗生素是一类应用广泛的广谱抗菌药物，主要包括庆大霉素 好的疗效，常用作兽医临床治疗及饲料药物添加剂。不规范用药会引起畜产品， 尤其是泌乳动物的乳汁中有药物残留，对人类的健康构成潜在危害，造成耳毒性 和’肾脏毒性。国内外相继规定了其在动物性食品中的最高残留限量。我国规定， 庆大霉素在牛奶中的最高残留限量为0．2mg／L。 国内外已建立了很多理化方法检测动物性食品中残留的庆大霉素。虽然有些 方法比较灵敏、精确，但由于花费大、时间长、技术要求高等原因而不适合大批 量样品的筛选。作为一种快速、灵敏、特异的方法，酶联免疫吸附测定法正逐渐 应用于药物的残留检测。本研究通过抗原的合成和抗体的制备，初步建立了GM 的ELISA测定方法，并模拟检测了牛奶中的药物残留。 为制备庆大霉素的单克隆抗体，用EDC法合成出硫酸庆大霉素与载体蛋白 剂与载体蛋白末端的羧基连接，暴露出完全抗原上的药物结构。经8DS．聚丙烯酰 胺电泳鉴定偶联成功。 争ELISA检测细胞培养上清，筛选阳性细胞。将筛选的阳性细胞株用有限稀释法 和6E10。将细胞扩大培养后于液氦冻存。 原工作浓度，测定腹水效价，达到1：80000。用腹水制备竞争抑制标准曲线，其检 限量浓度范围检测的需要。用链霉素等8种药物做竞争ELISA，显示该单抗与庆 大霉素以外的抗菌药物无交叉反应性。 建立间接竞争ELISA法，对牛奶样品中添加的药物进行测定。使用5种方法 对牛奶样品进行前处理，比较标准曲线及添加回收率，发现奶样离心脱脂后做5 标准偏差小于5％。 关键词： 庆大霉素；单克隆抗体；ELISA：残留检测；牛奶 ABSTRACT antibioticsare usedantibioticswithbroad of Aminoglycosidesfrequently spectrum antibacterial activity,mostlyincluding are usefultotreatCOWmastitisand very Kanamycin(1【M)etc．They are addedintofeedsforthe or animaldiseases． treatmentsof frequently prevention administrationwillleadtoresiduesinedible inthe However,illegal tissues，especially milkof dolatentharmtohuman in galactophorousanimals，andfinally and countriesandinternational hearingtoxicitykidneytoxicity．Many haveestablishedthemaximumresidueof limit antibioticsinanimal aminoglycosides tissuesforhuman thetolerancelimitofGentamicininmilkis consumption．And inChina． O．2mg／L chemicaland methodsfor Gen