两个改造后肿瘤抑素抗肿瘤活性肽活性与研究.pdfVIP

研究报告 ResearchPapers 生物化学与生物物理进展 ProgressinBiochemistryandBiophysics 2007,34(11):1152~1161 两个改造后的肿瘤抑素抗肿瘤活性肽活性研究* 1,2,3) 3)** 1 1 ) ) 王淑静 刘兴汉 季宇彬 陈 宁 1) 2) 哈尔滨商业大学药物研究所 哈尔滨 东北农业大学兽医学博士后流动站 哈尔滨 ( , 150076 , 150030 ; ; 3) 黑龙江省生物医药工程重点实验室 省部共建国家重点实验室培育基地 哈尔滨 - , 150081) 摘要 为了研究改造后的肿瘤抑素2个抗肿瘤活性肽的作用机制，明确其不同的抗肿瘤活性，采用基因工程技术原理，人 工合成肿瘤抑素中185～203位氨基酸所对应的 19肽和T7肽 (74～98位氨基酸)基础上改造的21肽碱基序列，将其与融合 蛋白表达载体pTYB2重组后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达，用几丁质亲和层析柱一步纯化，直接获得19肽 和21肽，利用MTT法、细胞生长曲线、TUNEL法、流式细胞仪早期细胞凋亡检测和细胞周期检测，小鼠H22腹水型转移 型肝癌实体瘤抑瘤实验并结合组织病理学切片，来研究19肽和21肽单独应用或联合应用对肿瘤细胞和内皮细胞生长和凋亡 的影响以及对体内肿瘤的抑制情况.体内外实验表明：获得的19肽抗肿瘤活性以直接作用肿瘤细胞为主，也有抑制新生血 管生成的作用.基因重组21肽抗肿瘤作用是通过抑制肿瘤组织新生血管生成实现的. 19肽、21肽联合应用对肿瘤细胞、内 皮细胞生长抑制和促凋亡作用明显增强，抗肿瘤活性大大提高.联合用药弥补了单独用药不足，产生协同抗肿瘤作用，可能 会成为今后肿瘤治疗的一个主要方向. 关键词 肿瘤抑素，蛋白质表达，细胞增殖，细胞凋亡，肿瘤治疗 学科分类号 Q78，Q25 肿瘤抑素(tumstatin)是胶原蛋白Ⅳα链的非胶 应用抗肿瘤和抗血管生成活性比较，研究发现，19 3 原区，在20世纪80年代作为肺-肾出血综合症的自 肽和21肽同时具有不同程度的抗肿瘤细胞和内皮细 [1] 胞生长的双重作用，而且联合应用抑制肿瘤生长和 身抗原被发现 . 2000年，Kamphaus及其同伴发现 它有2个不同的抗肿瘤活性区，分别执行直接和间 血管生成的作用更强，两者对肿瘤治疗具有协同作 [2] 用.通过对19肽、21肽抗肿瘤活性的比较研究，我 接抗肿瘤作用 .一个是具有直接抑制肿瘤细胞生 长、促进肿瘤细胞凋亡作用的185～203位氨基酸组 们对肿瘤抑素的作用机制有了新的了解，为肿瘤治 成的19肽.另一个是具有抑制肿瘤血管生长、间接 疗药物进一步开发应用、肿瘤的临床治疗提供了新 抑制肿瘤生长作用的T7肽 (74～98位氨基酸).目 的思路. 前，肿瘤抑素因其双重的抗肿瘤作用而受到人 1 材料和方法 [3] 们的普遍关注 .但肿瘤抑素的分子质量较大 材料 (28ku)，而且本身还含有肺-肾出血综合征的自身 1.1