奶牛孕酮单抗克隆抗体的制备、鉴定及ELISA方法的建立.pdf

中文摘要 体孕酮含量变化是预防和治疗母畜繁殖障碍性疾病的一种有效的方法。我们检测孕酮含量，必 须要有高效、灵敏和特异性的检测方法。本研究利用碳化二一哑胺法制各孕酮完全抗原，用杂交 瘤技术制备出孕酮单克隆抗体，建立了同相抗体ELIsA检测方法，试验大体过程和试验结果如 下： 首先选用孕酮衍生物一一孕酮一11 ．PAGE电泳鉴定证明偶联成功，可以进行动物免疫试验。 用免疫抗原免疫6～8周龄雄性Babl／c小鼠，免疫4次，每次间隔1个月，最后一次加强免 疫后的第三天，无菌取脾脏，用融合剂聚已二醇(PEG)将脾细胞和sP2／O骨髓瘤细胞进行融 换液，第ll天换液时，对有细胞集落的培养孔，以P4．oⅥ～包被酶标板，间接ELISA检测培养 孔，如果检测孔为阳性孔，那么采用有限稀释法对其进行克隆，待其检测孔100％达到刚性时， 停止克隆，最后获得两株稳定的抗孕酮的杂交瘤细胞株，分别命名为8G6、11AIl0两株杂交瘤 高且8Ge的亲和力优于11～．。 本实验以奶牛孕酮单抗克隆抗体8G6为基础，初步建立了孕酮酶免疫检测方法：检测抗原 清，撮佳封闭时间为37℃作用2h：8G6最佳工作浓度为1．39×lo 4pg／ml；HRP羊抗鼠酶标二抗 酶标仪ODt。㈣读数；孕酮标准品最适检测范围为o．1～100n∥mL，为下一步孕酮检测试剂盒或 生物传感器的研制奠定了基础。 关键词：孕酮，单克隆抗体，杂交瘤细胞株，ELIsA Il Abstract waskindofbebin．ItreaectedtI】econdjtjonof So we a ovaryaccurateJythaL Pr02estefone monjtored jnthe cowaSamethodwitchcould and廿eateddisorderof Pro鼯steronedairy prevent we should the with disease．1f diimide， pmpagation monitored，weprepareantigendicyclohexylcarbo some monoclonalantibodieswiththe a valid antj巾rOgesterone hy嘶domatec|lIl0109y，thendevelop sensitivemethod immunosorbantf研t11edetection course ofEn珂me—linked assay 0fPmgegcerone．The aIldtheresu】tsasfol】ows： ofexperiments waSa hemisuccinatewaS ProgeSteroneh印ten．Topr印areant．gen，11慢一hydroxyprogesterone tocarrief BsA锄dOVA was respectjvelyconjugatedproteins by usedfort11eimmunizationofmice．P4-oVAwasusedasme fortheELlSA．Both co鲥ngantigen