食管癌引流淋巴结细胞的培养及体内抑瘤试验.pdf

中文摘要 食管癌引流淋巴结细胞的培养及体内抑瘤试验 摘 要 node， 目的：肿瘤引流淋巴结(Tumor-draininglymph TDLN)是位于肿瘤引流区的淋巴结，它长期接受肿瘤抗原 的刺激，既是早期肿瘤细胞转移的暂时的天然屏障，又是肿 瘤细胞远处转移的中继站。TDLN含有丰富的淋巴细胞，由 于其特殊的位置，又含有较多的己摄取肿瘤抗原的树突状细 胞(Den“tic cell，DC)，是一种较好获得的对肿瘤细胞有很 强杀伤作用淋巴细胞的潜在来源。DC是体内功能最为强大 cell，APC)。在捕 的专职抗原递呈细胞(Antigenpresenting 获肿瘤抗原后，DC迁移至TDLN，发育成熟并递呈抗原， 诱导T细胞分化、成熟，杀伤肿瘤细胞。但是在患者体内， DC往往受到IL．10等抑制因子的作用不能有效地递呈抗原。 本实验采取体外培养食管癌引流区淋巴结细胞的方法，减少 抑制因子的作用，使DC有效地递呈抗原，得到大量对肿瘤 有特异性杀伤作用的细胞，再回输同体食管癌裸鼠移植瘤模 型，研究食管癌肿瘤引流区淋巴结细胞在裸鼠体内对肿瘤细 胞的生长抑制和杀伤作用。 方法：手术时摘除食管癌引流区肉眼判断无转移淋巴结 2—3枚。同时从食管外侧切开食管壁，避开纤维组织丰富处， 无菌切除癌组织一块。将淋巴结用D—Hank’s液冲洗两遍，去 除结缔组织和脂肪组织，用剪刀剪碎，悬于30毫升含IL．2 175U／，ml，IL．4 l 1 500IjI／m1，GM．CSFOOIjl，ml的I冲MI640培 养基中，置于37℃，5％C02培养箱培养。定期观察形态学 中文摘要 变化，收集部分细胞进行检测和流式细胞术(nowcytometry， FCM)分析。将切下的食管癌瘤块用D—Hank’s液冲洗两遍， 部皮下建立人食管癌裸鼠移植瘤模型。1周后将裸鼠随机分 1000U／ml 成共4组，每组6只。依次将生理盐水O．2ml：IL．2 7／ml O．2ml；LAK细胞2×lO 1000U／ml O．2ml，IL．2 O．2ml；TDLN 7／mlO．2ml，IL一21000U／，ml 细胞2×10 O．2ml局部注射4组裸鼠 1000U／ml 体内。每只裸鼠3天局部注射IL一2 O．2ml一次，测 量记录肿瘤的最长直径(a)和最短直径(b)，按体积 Linear Model和 (V)=兀ab2／6计算肿瘤体积，分别采用General ANoVA进行统计，分析移植瘤生长抑制情况。5 One．way 周后处死裸鼠取出瘤块。将瘤块一分为二，一半检测凋亡情 况，70％的酒精固定，研搓，分别过不锈钢网和铜网滤去细 O．1ml， 胞团块，收集细胞悬液，离心。取单细胞悬液1×105／ml 加入鸡血红细胞作为内参标准，与样品同步染色，加入EB (溴化已啶)1m1染色，上机检测：将另一半肿瘤组织放入 福尔马林溶液